COMPARAÇÃO DE MÉTODOS PARA QUANTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS OXIDADORAS DE AMÔNIA E NITRITO

Ana Paula Campos (DESA - UFMG); Eduardo Carvalho Silva (DESA - UFMG); Caroline Moura (DESA - UFMG); Mônica Mabub (DESA - UFMG); Juliana Calábria Araújo (CEFET - MG); Carlos Augusto Lemos Chernicharo (DESA - UFMG)

A remoção de nitrogênio é um aspecto importante do tratamento de águas residuárias, e geralmente é realizado por bactérias nitrificantes, tendo como principais representantes os gêneros Nitrosomonas e Nitrobacter que oxidam, respectivamente, o íon amônio a nitrito e posteriormente, o nitrito a nitrato. A quantificação desses grupos é de extrema importância para o monitoramento de sistemas biológicos de tratamento projetados para promover a nitrificação. Neste trabalho bactérias nitrificantes presentes em amostras de lodos ativados foram quantificadas por meio das técnicas de Tubos múltiplos (NMP) e hibridação in situ fluorescente (FISH). Os resultados de ambas as técnicas foram comparados, evidenciando as vantagens e desvantagens de cada uma. Tradicionalmente, as bactérias nitrificantes vêm sendo quantificadas através do método dependente de cultivo, que é a técnica de Tubos múltiplos ou Número Mais Provável (NMP). Para a quantificação por NMP a amostra de lodo aeróbio, proveniente do sistema de lodos ativados da ETE ARRUDAS-COPASA, foi macerada e diluída. Após três semanas de incubação (em meio específico contendo amônia e carbonato, ou nitrito e carbonato) à 28ºC foi feita a leitura dos tubos. A combinação de resultados positivos nas quintuplicatas de cada diluição forneceu o valor de NMP/ml de amostra inoculada. O FISH é um método direto para contagem de células, que utiliza sondas de oligonucleotídeos marcadas com corante fluorescente e complementares ao RNAr 16S. Utilizando as sondas Nso190 e Nit3 quantificou-se, respectivamente, as bactérias oxidadoras de amônia e as oxidadoras de nitrito. As células foram fixadas, hibridadas, coradas com DAPI e observadas ao microscópio de fluorescência. Os resultados obtidos indicaram maior número de bactérias Nitrosomonas por ml de lodo pela técnica de FISH quando comparado com o NMP, sugerindo que este último subestimou a quantidade de bactérias na amostra. Já as bactérias Nitrobacter estavam abaixo do limite de detecção do FISH em grande parte das amostras, possibilitando apenas uma comparação. Conclui-se que as técnicas de NMP e FISH foram adequadas à quantificação de bactérias nitrificantes. Não obstante, a técnica do NMP parece subestimar a quantidade real de células nitrificantes quando comparada com o FISH, porém esta última é uma técnica mais cara e sofisticada.