DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO MÍNIMA INIBITÓRIA DO CIANATO PARA CHROMOBACTERIUM VIOLACEUM

Rafael Azevedo Baraúna (UFPA); Alessandra Ciprandi (UFPA); Rubens Ghilardi (ELETRONORTE); Maria Paula Cruz Schneider (UFPA); Artur Luiz da Costa Silva (UFPA)

A Chromobacterium violaceum é uma betaproteobactéria de vida livre amplamente distribuída em ambientes tropicais e subtropicais do mundo. Com o sequenciamento completo de seu genoma foram descritos vários genes com potencial biotecnológico, como os genes que fazem parte do operon cyn, os quais estão ligados ao processo de detoxificação do cianato. Compostos tóxicos para o meio ambiente e para a saúde humana, como o cianato, em alguns casos podem ser transformados por bactérias até concentrações que não sejam letais para o seu crescimento. Para determinar este nível de resistência, foi feita a análise da Concentração Mínima Inibitória (MIC) onde culturas de C. violaceum foram inoculadas em meio LB líquido com ampicilina e crescidas durante a noite com pequenas doses do composto, sendo posteriormente tratadas com concentrações que variavam de 1uM à 100mM de cianato. A MIC é definida como a menor concentração do composto no qual a bactéria não consegue crescer. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. A C. violaceum se mostrou resistente para doses que variam de 1uM à 1mM. Em 5mM houve inibição do crescimento bacteriano, chegando a 75,5% do valor de OD600 em comparação com o grupo controle. Acima de 10mM a C. violaceum foi pouco resistente ao cianato e na concentração de 50mM se caracterizou a MIC, visto que o crescimento bacteriano foi mínimo. A análise estatística ANOVA mostrou que não houve diferença na resistência dos diferentes grupos que haviam sido induzidos ou não com pequenas doses do composto durante a noite. Estes resultados sugerem que a bactéria tenha uma reposta bioquímica rápida a presença do cianato. Seu nível de resistência é duas vezes menor em comparação com outros microorganismos como Pseudomonas pseudoalcaligenes, que cresce em doses de 50mM de cianato e tem sua MIC em concentrações de 100mM do mesmo composto. Esta diferença pode estar relacionada à constituição de seus operons cyn, que em C. violaceum é formado por três genes, enquanto em P. pseudoalcaligenes é formado por cinco. A caracterização da sua capacidade de crescimento em meios contendo cianato é um dos passos iniciais para a realização de estudos sobre sua possível utilização como organismo modelo no processo de bioremediação deste composto.

Instituição de fomento: ANEEL/ELETRONORTE; FAPESPA; CNPq.