ESTUDO DO LOCUS OF ENTEROCYTE EFFACEMENT DE AMOSTRAS DE ESCHERICHIA COLI ENTEROPATOGÊNICA ATÍPICAS

Sérgio Paulo Dejato Rocha (IBu); Cecília Mari Abe (IBu); Sílvia Yumi Bando (IBu); Vanessa Sperandio (UTSW); Waldir Pereira Elias Junior (IBu)

Introdução: Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é capaz de causar uma lesão histopatológica na mucosa intestinal denominada attaching-effacing (A/E). Essa lesão é desencadeada por proteínas que são codificadas no locus of enterocyte effacement (LEE), organizado em 5 operons (LEE1-5). EPEC é classificada como típica ou atípica (aEPEC), pela presença ou ausência do plasmídio EAF, respectivamente. Objetivo: Análise estrutural e funcional da região LEE de aEPEC. Métodos: Quatro amostras de aEPEC foram estudadas: BA320 (ALL), 9100 (AD), Ec292/84 (AA) e BA4010 (não aderente/NA). As capacidades de aderir e causar a lesão A/E foram investigadas em cultura de células HeLa, HEp-2, Caco, T84 e HT29 e a fosforilação de Tir em HEp-2. A presença dos 31 genes de LEE e de tccP/espFu foi pesquisada por PCR ou slot-blot. A transcrição dos operons de LEE foi verificada por PCR em tempo real (qRT-PCR) e microarray, após o cultivo bacteriano em DMEM (qRT-PCR e microarray) e após contato com células HeLa (qRT-PCR). A expressão de intimina, Tir, EspA, EspB e EspD foi detectada por immunoblotting. Resultados e Discussão: Os padrões de adesão observados em células HeLa e HEp-2 foram mantidos na linhagens celulares de origem intestinais. A capacidade de formar a lesão A/E, fosforilar Tir e a presença de tccP foi detectada somente na amostra que expressa o padrão ALL. Dentre os genes de LEE verificados por PCR, 11 não foram detectados nas diferentes amostras, mas foram detectados por slot-blot. O perfil transcricional de LEE das amostras AA, DA e NA foi comparado com o da amostra LAL. Os níveis de transcrição de LEE1-5 foram menores nas amostras AD, AA e NA em ambas as condições de cultivo, exceto para LEE4 da cepa AD que apresentou nível maior de transcrição no cultivo em DMEM. As análises em microarray mostraram níveis menores de transcrição das amostras AD, AA e NA do que a LAL. Todas as 4 amostras estudadas expressaram intimina, Tir e EspABD. Apesar de não causar a lesão A/E, todos os genes de LEE foram detectados nas amostras AD, AA e NA, portanto, a estrutura de LEE está preservada nas amostras de aEPEC estudadas. A transcrição e a expressão de LEE1-5 demonstram a funcionalidade de LEE nestas amostras. A incapacidade dessas amostras de causar a lesão A/E in vitro decorre da ausência de tccP e dos reguladores perABC.