IDENTIFICAÇÃO DA PRESENÇA DE PAPILOMAVIRUS TIPOS 8, 9 E 10 E CONFIRMAÇÃO DE UM PROVÁVEL NOVO TIPO DE BPV EM AMOSTRAS DE GADO DE PERNAMBUCO

Cybelle Cristina Rocha Carvalho (UFPE); Marcus Vinícius Aragão Batista (UFPE); Valdir Queiroz Balbino (UFPE); Antônio Carlos Freitas (UFPE)

O papilomavírus Bovino (BPV) é um vírus que causa lesões na pele e mucosa em bovinos e associado a co-fatores ambientais pode desenvolver o câncer de bexiga urinária e do trato digestório superior em bovinos. No Brasil, embora não existam dados oficiais, a papilomatose é um problema para a pecuária nacional. Até o momento são bem caracterizados seis diferentes tipos de BPVs (1-6) e recentemente foram seqüenciados os genomas dos BPVs 7, 8, 9 e 10. Em trabalho anterior, nosso grupo mostrou a presença de diferentes tipos de BPVs (1-6), alem de evidências da presença de um novo tipo de BPV em amostras de lesões cutâneas de animais do Estado de Pernambuco. O objetivo deste trabalho foi confirmar a presença do provável novo tipo e avaliar a presença dos BPVs 7, 8, 9 e 10 recentemente caracterizados. Para isto foram coletadas 36 amostras de lesões cutâneas de bovinos Bos taurus em uma propriedade fornecedora de leite localizada no município de Ribeirão em Pernambuco. Foram realizadas PCRs a partir de Taq polimerase comum com primers degenerados FAP59/64. O produto da PCR foi seqüenciado e o resultado analisado a partir do programa Blast do site www.ncbi.nlm.nih.gov. Nas amostras em que houve indicação da presença de possível novo tipo viral foi feita nova PCR utilizando Taq polimerase de alta fidelidade e os mesmos primers genéricos. O produto da PCR foi clonado em vetor pGEM e sequenciado. A qualidade do sequenciamento foi analisada com o auxílio dos programas Pregap4 4.0 e Gap4 4.0 que fazem parte do Staden, o valor de Phred assumido para a análise da sequência foi 30. Foi realizada a análise com os programas Bioedit e Blast, a fim de verificar a similaridade com as seqüências dos tipos virais já descritos. Para detectar os BPVs 8, 9 e 10 foram feitas PCRs utilizando taq polimerase comum e primers específicos desenhados a partir do Primer Blast (site www.ncbi.nlm.nih.gov) e IDT DNA (site www.idtdna.com). Os resultados demonstraram a presença de um provável novo tipo de BPV, denominado UFPE-01. Este provável novo tipo tem uma similaridade de 71% com BPV-4. Também foi comprovada a presença dos BPV-8 (2,7%), BPV-9 (5.5%) e BPV-10 (30%) nas amostras analisadas.