AVALIAÇÃO DA PCR EM TEMPO REAL PARA DETECÇÃO DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS EM AMOSTRAS DE LÍQUOR DE PACIENTES COM MENINGITE TUBERCULOSA

Maria Gisele Gonçalves (IAL); Lucila Okuyama Fukasawa (IAL); Maristela Marques Salgado (IAL); Felipe Augusto Souza Gualberto (IIER); Jose Vidal (IIER); Augusto César Penalva de Oliveira (IIER); Terezinha Pereira de Araújo (IAL); Anna Vera Custódio (IAL); Lee H Harrison (Pitt); Claudio Tavares Sacchi (IAL)

A Meningite Tuberculosa (MTB) é a forma mais grave e fatal entre as formas extra-pulmonares de TB. Aproximadamente 30% dos casos resultam em óbito e em grande parte desenvolvem-se seqüelas. O diagnóstico da doença é dificultado pelas limitações das técnicas laboratoriais comumente utilizadas como a cultura e baciloscopia, aliada a avaliação das manifestações clínicas, radiológicas e liquóricas do paciente. Além de apresentar baixa sensibilidade e positividade, a cultura ainda é extremamente demorada, levando até 60 dias para a liberação do resultado. Desta forma, o desenvolvimento de métodos laboratoriais com alta sensibilidade e especificidade e que resultem em detecção rápida do Mycobacterium tuberculosis (Mtb) tornam-se extremamente necessários. Um método promissor é a detecção do Mtb no líquido cefalorraquidiano (LCR) através da reação da PCR em tempo real (RT-PCR), tendo como gene alvo o mpt64. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a utilização deste teste de RT-PCR para o diagnóstico laboratorial do Mtb em amostras de pacientes com meningite tuberculosa. Foram analisadas amostras de LCR de 115 pacientes com suspeita de MTB, classificados clinicamente em casos definitivos (n=6), prováveis (n=6), possíveis (n=11) e não-MTB (n=82) de acordo com dados laboratoriais e sintomas neurológicos apresentados pelos pacientes. A sensibilidade do teste foi determinada através da obtenção do limite mínimo de detecção (LMD) com DNA extraído e purificado em concentrações de 20 ng a 0,2 fg. A extração e purificação do DNA foram realizadas utilizando-se kit comercial de coluna de sílica acrescido de mutanolisina e lisozima. O LMD do teste obtido foi de 200 fg. Considerando os casos definitivos e prováveis com baciloscopia BAAR positiva, a RT-PCR apresentou sensibilidade de 92%. A especificidade do teste foi de 100%. Os resultados do presente trabalho indicaram que a RT-PCR apresentou-se como uma técnica sensível, específica, sem interferência pela antibioticoterapia prévia, representando um método promissor para o diagnóstico rápido da MTB.