BIOENSAIO QUALITATIVO, DETECÇÃO DE TOXINAS E TESTE QUANTITATIVO DE ADERÊNCIA COM CÉLULAS HEP-2 EM CEPAS DE BACILLUS THURINGIENSIS

Ana Carolina Garrido Ognibene (PG-micro (UERJ)); João Ramos Costa Andrade (PG-micro (UERJ)); Clara de Fátima Gomes Cavados (IOC - FIOCRUZ)

Bacillus thuringiensis (Bt) e Bacillus cereus (Bc) são fenotípica e genotipicamente similares, embora o Bt caracterize-se pela presença do cristal protéico que confere entomopatogenicidade. Cepas de Bt tem sido descritas em surtos de gastrenterite em humanos, e carreiam genes codificadores de enterotoxinas relacionadas à virulência de Bc, este um reconhecido agente enteropatogênico. Sendo o Bt uma bactéria entomopatogênica amplamente empregada no controle de insetos vetores com importância em Saúde Pública, e devido à sua estreita relação genética com Bc, neste estudo buscamos cepas de Bt com alta atividade entomotóxica, reduzida expressão de enterotoxinas e baixa adesão aos epitélios humanos, propriedade considerada como pré-requisito à  colonização das mucosas do hospedeiro. Usamos larvas L₃ de Aedes aegypti e de Culex quinquefasciatus para determinar a atividade biológica qualitativa das cepas. Pesquisamos os genes nheA, nheB, nheC (enterotoxina não hemolítica, NHE), hblA, hblD, hblC (hemolisina BL, HBL), cytK (citotoxina K) e entFM (enterotoxina FM) através da técnica da PCR e avaliamos a atividade adesiva através de ensaios quantitativos de aderência com a célula epitelial humana HEp-2 (ATCC CCL23; carcinoma de laringe). No bioensaio qualitativo, 11 das 24 cepas de Bt examinadas causaram 100% de mortalidade para as larvas de Aedes e Culex sp, demonstrando alta toxicidade e eficácia. Os genes do complexo HBL ocorreram em 19 cepas, sendo 1 delas negativa para hblA e outra para hblD. Genes do complexo NHE ocorreram em 18 cepas, sendo 4 delas negativas para nheA, 1 negativa para nheA e nheB e outra negativa para nheB e nheC. Os genes cytK e entFM ocorreram em 17 e 20 cepas, respectivamente. Até o momento, de 22 cepas estudadas quanto a aderência para células HEp-2, 25% delas mostraram índices iguais ou superiores a 1,7 x 10⁵ UFC/ml., índice obtido para a cepa  Escherichia coli K12 DH5α, controle negativo para adesão celular. As demais cepas mostraram índices inferiores a este valor. O emprego de Bt como biolarvicida requer análise mais cuidadosa quanto à expressão de outros fatores potenciais de virulência, como atividade citotóxica e invasividade a células, de forma que a sua aplicação seja inócua para organismos não-alvo.