PROSPECÇÃO DE GENES BIODEGRADADORES DE PETRÓLEO.

Taís Silveira Ribeiro (UFRN); Uaska Bezerra E Silva (UFRN); Lucymara Fassarella Agnez Lima (UFRN)

O número total de células procarióticas na Terra tem sido estimado em 4 a 6x1030, sendo que apenas cerca de 1% dos microrganismos presentes no meio ambiente podem ser cultivados, através de técnicas padrão de cultivo e plaqueamento, se apresentando, portanto, como um enorme pool biológico e genético que pode ser explorado visando a identificação e a caracterização de genes com potencial biotecnológico. Dentro desta perspectiva, a abordagem metagenômica foi aplicada neste trabalho a partir de metodologias de seleção funcional objetivando a identificação de novos genes relacionados a degradação de hidrocarbonetos. Com esse objetivo, uma biblioteca metagenômica foi construída a partir do DNA extraído de amostras de solo coletadas em três pontos distintos nas margens do rio Jundiaí – Rio Grande do Norte. O material genético foi fragmentado mecanicamente por sonicação, os fragmentos resultantes foram inseridos no vetor de expressão pBC (stratagene) e as construções foram inseridas em cepas bacterianas de Escherichia coli (DH10B). Essa biblioteca foi analisada funcionalmente utilizando meio de cultura líquido Luria-Bertani (LB), suplementado com petróleo não refinado, sob uma temperatura de 37°C, onde as amostras foram monitoradas com intervalo de 4 em 4 dias durante um período de um mês. A partir do “screening” inicial foram observados 36 clones com atividade de degradação de óleo, dentre os quais podem estar inclusos alguns resultados falso-positivos. Para obter a confirmação da atividade e exclusão de resultados indesejáveis as construções serão extraídas e novas cepas bacterianas serão transformadas e submetidas às mesmas condições do “screening” primário. Os clones que apresentarem resultados reprodutíveis serão selecionados para seqüenciamento e análise por ferramentas de bioinformática e posteriormente as proteínas de interesse serão analisadas na intenção de serem expressas, isoladas e submetidas a ensaios funcionais.