PROSPECÇÃO DE NOVOS GENES QUE CONFIRAM RESISTÊNCIA AO ESTRESE SALINO.

Uaska Bezerra E Silva (UFRN); Rita de Cássia Barreto da Silva (UFRN); Lucymara Fassarella Agnez Lima (UFRN)

A diversidade microbiana conhecida está resumida a 5.000 espécies, o que representa apenas uma irrisória fração da real biodiversidade. A razão para se saber tão pouco sobre os microorganismos é atribuída ao fato de que estes são microscópicos e apresentam pouca variação morfológica. Além disso, a incapacidade de estabelecer culturas puras tem sido uma das principais limitações na determinação da extensão da biodiversidade. Esta diversidade apresenta um enorme pool biológico inexplorado que pode ser usado para descoberta de novos genes, novas vias metabólicas e seus produtos. Na maior parte dos ambientes, aproximadamente 99% dos microorganismos não pode ser cultivada por técnicas tradicionais. Por isso, métodos independentes de cultura são essenciais para entender a diversidade genética, a estrutura populacional e leis ecológicas da maioria das populações microbianas. Para solucionar tal impasse, uma nova metodologia denominada “metagenômica” vem sendo utilizada. Em particular, a busca de genes baseada na construção e análise de bibliotecas derivadas de metagenoma de solo gera oportunidades para estudar e explorar, de forma abrangente, a enorme diversidade genética e metabólica de microrganismos do solo. Além do solo, outro ecossistema com elevada diversidade biológica são os rios, mas poucos foram examinados utilizando bibliotecas metagenômicas. A diversidade de bactérias nos rios pode ser especialmente elevada, pois eles podem conter misturas de bactérias aquáticas e terrestres, incluindo diversos táxons típicos de solo. Dentro desta perspectiva, a abordagem metagenômica foi aplicada neste trabalho a partir de metodologias de seleção funcional visando a identificação de novos genes relacionados ao estresse salino. Com esse objetivo, uma biblioteca metagenômica foi construída a partir do DNA extraído de amostras de solo coletadas em três pontos distintos nas margens do rio Jundiaí – Rio Grande do Norte. O material genético foi fragmentado mecanicamente por sonicação e inseridos no vetor de expressão pBC (stratagene) e as construções foram inseridas em Escherichia coli (DH10B). Essa biblioteca foi analisada funcionalmente utilizando meio de cultura sólido Luria-Bertani (LB) cuja concentração de NaCl variou de 0.17M a 0.85M e 15 clones cresceram em meio hipersalino. As construções foram extraídas e transferidas para novas cepas DH10B para repetição do ensaio e confirmação dos resultados. As seqüências dos clones foram obtidas e submetidas à ferramenta BlastX onde foi verificado que alguns clones codificam proteínas hipotéticas de microorganismos tanto da divisão Archaea como da divisão Bacteria. Atualmente, curvas de sobrevivência estão sendo construídas para confirmação e quantificação da resistência ao estresse salino apresentada pelos clones.