CONSTRUÇÃO DO VETOR DE EXPRESSÃO PPICZAAL1HPV16 PARA PRODUÇÃO EXTRACELULAR DA PROTEÍNA L1 DE HPV-16´EM CÉLULAS DA LEVEDURA PICHIA PASTORIS

Janaine Cavalcanti Carvalho (UFPE); André Luiz S. Jesus (UFPE); Marcelo Nazário Cordeiro (UFPE); Filipe Colaço Mariz (UFPE); Eliane C. Coimbra (UFPE); Julia C. Campos (UFPE); Elyda Gonçalves Lima (UFPE); Antonio Carlos de Freitas (UFPE)

Os papilomavírus constituem um grupo de pequenos vírus que infectam células epiteliais, podendo ser responsável pelo aparecimento de lesões benignas e malignas. Dentre os mais de 120 tipos identificados, o HPV-16 constitui o principal agente etiológico do câncer cervical, que é o segundo maior causador de morte, após o câncer de mama, em mulheres no mundo. Na América Central e América do Sul, os cinco tipos de HPV mais prevalentes são o 16, 18, 45, 31 e 33. No Brasil, o HPV 16 é o mais prevalente em todas as regiões, todavia, há variações em relação aos outros tipos. O HPV é constituído por uma molécula de DNA circular dupla fita com cerca de 8 Kb. Os genes de expressão tardia (L, do inglês Late) codificam as proteínas L1 e L2 que formam o capsídeo viral. Quando produzidas em sistemas de expressão eucarióticos, as proteínas L1 são capazes de se organizar como virus-like particles (VLP). O complexo ciclo de replicação do HPV dificulta a montagem de um sistema de propagação em laboratório que permita a produção de vírions para fins vacinais. Por não conterem o genoma viral, as VLP não são infecciosas ou oncogênicas sendo, portanto, candidatas para o desenvolvimento de vacinas profiláticas contra os papilomavírus. O objetivo deste projeto foi a construção do vetor de expressão pPICZAaL1H16 para expressar a proteína L1 de HPV 16 em células da levedura Pichia pastoris. Em primeiro lugar o gene L1 foi amplificado por PCR a partir do genoma completo de HPV 16, disponível em vetor pBR322H16. Para facilitar a clonagem, foram incluídos nas extremidades dos primers, sítios para as enzimas de restrição Kpn I e SaL I, também presentes no vetor de expressão pPICZAa. Os produtos gerados por PCR foram clonados no vetor de passagem pGEM-T, e a construção pGEML1H16 foi submetida à digestão para liberação do inserto L1. O L1H16 purificado foi subclonado no vetor de expressão pPICZAa, gerando a construção pPICZAaL1H16. Esta foi analisada quanto à presença e orientação do inserto L1 por meio de PCR e digestão enzimática. Esta construção permitirá o estabelecimento de um sistema de expressão, baseado em células da levedura P. pastoris, para a expressão da proteína L1 HPV 16 e conseqüente produção de VLP.