DESENVOLVIMENTO DE UMA CONSTRUÇÃO VACINAL BASEADA NO GENE E5 DE BPV USANDO "CODON USAGE" A SER APLICADA EM IMUNIZAÇÃO GENÉTICA

Rafaelle Cavalcante de Lira (UFPE); Andre Luiz Santos de Jesus (UFPE); Eliane Campos Coimbra (UFPE); Antonio Carlos de Freitas (UFPE)

Os papilomavírus constituem um grupo de pequenos vírus de DNA de dupla fita caracterizados por induzirem a formação de lesões que são em geral benignas, podendo regredir naturalmente ou se transformar em tumores malignos, gerando importantes perdas econômicas aos criadores. BPV tipo 1 e 2 são carcinogênicos e estão relacionados com o câncer da bexiga urinária e o tumor sarcóde em eqüino. Como existem muitos animais já infectados e afetados pela doença, uma estratégia vacinal terapêutica se torna necessária e muito aguardada pelos criadores. A imunização genética é uma estratégia bastante eficaz na indução de imunidades humoral e celular num grande número de modelos animais. O foco deste trabalho foi realizar a construção e avaliação funcional in vitro do vetor vacinal pCIE5sintB1/B2, usando o gene E5 otimizado para expressão em célula de mamífero. A sequênia do gene E5 de BPVs 1 e 2 foram obtidas do GeneBank e analisadas quanto a suas diferenças e ao “codon usage”, sendo então construída uma sequência otimizada a qual foi sintetizada (E5sintB1/2), contendo um epitopo AU1 no N-terminal. O gene E5sint foi então clonado no vetor de expressão pCI-neo usando sítios de restrição inseridos no gene sintético. A construção pCI-E5sintB1/2 foi seqüenciada para confirmação. Para análise da funcionalidade o vetor pCI-E5sintB1/2 foi transfectado em células 293 por meio do Kit TransFast. Após 48 horas de cultivo as células foram coletadas e os extratos celulares processados para preparação do extrato protéico celular e de RNA total. A expressão gênica foi avaliada por meio de RT-PCR, SDS-PAGE e dot-blot (usando anticorpo contra o epítopo AU1). Os resultados obtidos mostraram que apenas as células transfectadas com a construção pCIE5sintB1/B2 apresentaram transcrição do gene E5 e conseqüente produção da proteína. Estes resultados confirmam a funcionalidade do vetor vacinal em células de mamífero.