DESENVOLVIMENTO DE BIOSSENSOR PARA DETECÇÃO COLORIMÉTRICA DE BACTÉRIAS PATOGÊNICAS VEICULADAS POR ALIMENTOS

Ana Clarissa dos Santos Pires (UFV); Nilda de Fátima Ferreira Soares (UFV); Luis Henrique Mendes da Silva (UFV); Nélio José de Andrade (UFV); Maria do Carmo Hespanhol da Silva (UFV); Samira Gama Reis (UFJF); Rêmili Freitas Soares (UFV); Mireille Le Hyaric (UFJF)

Atualmente, existe uma demanda por tecnologias capazes de identificar rapidamente microrganismos e toxinas veiculados por alimentos. Os biossensores permitem a identificação rápida e precisa de agentes patogênicos. Este trabalho objetivou desenvolver biossensor vesicular colorimétrico e avaliar a sua resposta em função da presença de bactérias de interesse em alimentos. Prepararam-se vesículas de ácido pentacosadiinóico, a partir da dissolução dos compostos em solvente orgânico. O solvente foi removido com fluxo de nitrogênio e água deionizada foi adicionada, sendo a solução sonicada para promover a formação das vesículas. As vesículas foram armazenadas a 4 ºC por 12 horas e, em seguida, foram polimerizadas sob radiação UV (254 nm), originando uma suspensão de coloração azul intensa. Para a avaliação da resposta colorimétrica, 300 μL de suspensões ativas de Escherichia coli ATCC 11229, Salmonella cholerasuis ATCC 6539, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Listeria innocua ATCC 33090 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 foram adicionados em 1 mL da suspensão vesicular. Além disso, suspensão vesicular pura e vesículas adicionadas de 300 μL de caldo Tryptic Soy (TSB) estéril foram avaliadas como controles. Após a transição colorimétrica, as suspensões foram analisadas em espectrofotômetro UV-visível (Shimadzu UV-2550). Observou-se, visualmente, que a transição colorimétrica aconteceu imediatamente após a adição das suspensões bacterianas na suspensão vesicular. A partir da análise espectrofotométrica, verificou-se que as vesículas de coloração azul apresentaram máximo de absorção em 640 nm, com um ombro vibrônico em 590 nm. A adição de caldo TSB estéril provocou pequena redução do pico em 640 nm e o surgimento de um pequeno pico de absorção em 540 nm. Quando as suspensões bacterianas foram adicionadas às vesículas, grande redução da absorção em 640 nm e aumento pronunciado da absorção em 540 foram observados indicando, portanto, a transição de cor. Verificou-se que apesar da transição colorimétrica ter sido observada para todas as bactérias testadas, houve variação na resposta colorimétrica dessas, perceptível também visualmente. O biossensor desenvolvido foi capaz de detectar rapidamente diferentes bactérias, além de permitir a criação de uma "impressão digital" colorimétrica para bactérias de interesse em alimentos.