PROTEÔMICA COMPARATIVA DE CRYPTOCOCCUS GATTII A TEMPERATURA DE INFECÇÃO E AMBIENTE

Juliana Ferraz de Correa (UFRGS); Marilene Henning Vainstein (UFRGS)

Cryptococcus gattii é uma levedura basidiomicética, considerada um patógeno primário e um dos agentes etiológicos da criptococose. Dentre os principais fatores relacionados à patogenicidade desse microrganismo estão a cápsula polissacarídica, a produção do pigmento melanina e a capacidade de crescimento a 37°C, que o torna capaz de estabelecer infecção no hospedeiro. A identificação de proteínas envolvidas na interação patógeno-hospedeiro é de suma importância, possibilitando a compreensão dos mecanismos utilizados pelo patógeno para a infecção. Atualmente poucos trabalhos envolvendo Cryptococcus spp. e análises proteômicas são reportados. Neste estudo estão sendo analisadas duas linhagens de C. gattii com o objetivo de identificar proteínas diferencialmente expressas em crescimento a 25°C e 37°C. Após cultivo em caldo Sabouraud a 25°C e 37°C, as células foram processadas e submetidas à extração das proteínas totais. As proteínas foram quantificadas pelo método de Bradford e visualizadas por eletroforese em SDS-PAGE. As condições para a eletroforese foram padronizadas sendo ótimas utilizando-se 1,2mg de proteínas totais em tiras de 17cm com faixa de pH de 4-7. Os géis de poliacrilamida foram corados com Comassie Brilliant Blue G250 e analisados quantitativa e qualitativamente com o software PDQuest Basic 8.0 (Bio-Rad). As proteínas que apresentarem expressão diferencial serão excisadas dos géis e submetidas a análises por espectrometria de massas (ESI-Q-TOF). Os espectros Ms/Ms (mass spectrum/mass spectrum) serão analisados com o software MASCOT (MatrixScience) contra o banco de dados de Cryptococcus neoformans (H99) obtido do Broad Institute. Observações preliminares sugerem que podem existir diferenças entre as linhagens nas proteínas expressas a 37°C, porém, até o momento os resultados não são conclusivos. Por conseguinte, serão repetidas as análises a 37°C para validação estatística dos dados obtidos e serão realizadas as análises a 25°C.