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A detecção de metalo-β-lactamases (MβL) em bacilos gram-negativos não fermentadores vem ganhando importância nos últimos anos, não só pela maior freqüência de sua participação como agentes responsáveis por quadros infecciosos graves, como também pela selecionada resistência aos antimicrobianos. Este trabalho apresentou como objetivos detectar fenotipicamente MβL em isolados de P. aeruginosa e A. baumannii resistentes a imipenem; verificar o percentual de resistência nos hospitais pesquisados; correlacionar as cepas MβL positivas com os hospitais, as amostras clínicas e os setores hospitalares de origem e comparar o perfil de resistência das amostras produtoras de MβL com as amostras não produtoras. No período de Junho a Novembro de 2008, foram analisadas 138 cepas consecutivas de P. aeruginosa (65,7%) e 72 de A. baumannii (34,3%). Destas, foram triadas 56 amostras de P. aeruginosa e 19 de A. baumannii resistentes a imipenem para os testes de detecção fenotípica de MβL. Para o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, utilizou-se o método de Kirby-Bauer. A detecção fenotípica das amostras produtoras de MβL foi realizada através das técnicas do disco aproximação e disco combinado. A proporção de P. aeruginosa resistente a imipenem correspondeu a 40,6% e para A. baumannii, 26,4%. Os testes de disco aproximação e disco combinado para detecção de MβL revelaram positividade para 18 (38,3%) amostras de P. aeruginosa e 1 (5,6%) de A. baumannii. A porcentagem de P. aeruginosa produtora e não-produtora de MβL, diferiu estatisticamente dependendo do tipo de amostra clínica em que o microorganismo foi isolado (p= 0,0014). Cepas de P. aeruginosa resistente a imipenem MβL positivas foram encontrados com maior freqüência na UTI, com o total de 15 isolados (83,3%). A única cepa de A. baumannii produtora de MβL foi isolada da UTI. Comparando-se o perfil de resistência frente aos antimicrobianos das amostras produtoras e não-produtoras de MβL, observa-se que as primeiras apresentaram maior índice de resistência. Todos os isolados apresentaram sensibilidade para polimixina. Detectou-se através de métodos fenotípicos a presença de MβL em isolados de P. aeruginosa e A. baumannii resistentes a imipenem em dois hospitais estudados.