A resistência às drogas anti-tuberculose (TB) e é atualmente a ameaça mais importante que compromete o controle mundial da TB. Atualmente os programas governamentais de controle da TB (PCT) estabelecem tratamentos padronizados. O tratamento consiste em uma associação de drogas em que a Rifampicina (RIF) e a Isoniazida (INH) são as principais drogas utilizadas. O teste de sensibilidade a drogas (TSA) é uma ferramenta recomendada pelo PCT para avaliar a resistência do M. tuberculosis (Mt) frente aos fármacos, detectar falência de tratamento e monitorar a resistência primária e/ou adquirida. Os métodos de TSA são trabalhosos e demorados, levando em média cerca de 7 a 30 dias para a obtenção de resultados. Assim, é necessário o desenvolvimento de métodos mais rápidos para a detecção de resistência de Mt.
O objetivo deste trabalho é validar a técnica da PCR em Tempo-Real (RT-PCR) para a detecção rápida da resistência de Mt a INH e RIF. A resistência e/ou sensibilidade a INH e RIF de 990 cepas de Mt foi analisada simultaneamente pelo método automatizado de MGIT 960 e pela técnica RT-PCR no Instituto Adolfo Lutz de São Paulo.
Para a detecção de resistência por RT-PCR a INH foram utilizadas sondas específicas para o códon 315 do gene katG e para a resistência a RIF sondas para um fragmento do gene rpoB.
Todas as cepas que apresentaram resistência a INH e RIF em um dos métodos e 10% das sensíveis foram seqüenciados os fragmentos de interesse dos genes katG e rpoB.
Resultados parciais revelam 100% de especificidade e sensibilidade de 56% e 97% para INH e RIF, respectivamente. Para INH a sensibilidade passou a ser de 73% quando sonda específica para o gene inhA foi adicionada ao teste. Ao analisar seqüências dos fragmentos dos genes katG e rpoB já realizadas, observamos que 30% a 40% das cepas fenotipicamente resistentes à INH e RIF também apresentaram mutações no gene inhA ou em outros pontos do gene rpoB.
Estes dados revelam que a técnica de RT-PCR é promissora para detecção de resistência a INH e RIF podendo contribuir para a otimização do tratamento da tuberculose.
Apoio financeiro: Sec de Estado da Saúde de SP, CNPq No 573830/2008-8 e Fogarty International Center Global Infectious Diseases Research Training Program (D43TW006592).