TRIAGEM DE BIBLIOTECAS METAGENÔMICAS PARA OBTENÇÃO DE CLONES COM ATIVIDADE DE FITASE

Lucas Silva Carvalho (UCB); Betania Ferraz Quirino (Embrapa Agroenergia); Janaina Fernandes de Araújo (UCB); Ricardo Henrique Krüger (UnB)

A diversidade microbiana que inclui organismos cultiváveis e não cultiváveis pode ser explorada para fins biotecnológicos por meio de técnicas moleculares. A abordagem metagenômica possibilita extração e clonagem do DNA de uma microbiota de interesse sem haver necessidade de cultivo. Bibliotecas metagenômicas de expressão podem ser utilizadas para explorar a diversidade metabólica de comunidades bacterianas através de sua triagem para atividades catalíticas de interesse. No processo de produção de biodiesel a partir da prensagem de sementes oleaginosas há formação de uma torta residual que frequentemente não é adequada para alimentação de animais monogástricos dada a presença de fitato em sua composição. A fitase é uma enzima capaz de eliminar o fitato que é um complexo de inositol e fosfato. Neste trabalho, bibliotecas metagenômicas de expressão de pequenos insertos (inserto mediano de 8kb), provenientes de DNA metagenômico de rúmen de caprino e solo de cerrado sensu stricto, foram triadas na busca de clones que apresentassem atividade de fitase. Para isto foram utilizados protocolos de screening em meios de cultura específicos para identificação de clones com esta atividade. Inicialmente as bibliotecas são plaqueadas em meio contendo 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (X-phosphate) que se liga ao complexo enzimático de fosfatases deixando as colônias azuis. Seguidamente a este screening será feito um ensaio com molibidato de amônio e fitato de sódio com os clones positivos, o molibidato de amônio na presença de fosfatases forma um complexo azul que pode ser mensurado por espectrofotometria em 620 nm e a curva de calibração será feita com Aspergillusficum. Os resultados desta seleção de clones ativos para fitase bem como a análise preliminar dos clones positivos serão mostrados.