CONSTRUÇÃO E ANÁLISE DE BIBLIOTECA GENÔMICA DE LATOSSOLO SOB CULTIVO DE CUPUAÇU (THEOBROMA GRANDIFLORUM) NA REGIÃO AMAZÔNICA. 

Fabíola da Silva Rodrigues (UEA); Luiz Antonio de Oliveira (INPA); Spartaco Astolfi Filho (UFAM); Luciana Leomil (ULBRA - MAO)

A atividade e a estrutura da comunidade microbiana são altamente influenciadas pelas características de seu habitat. Diversos componentes dos exsudatos de plantas atuam como limitantes dessa população. Para estimar a diversidade da comunidade microbiana de solo sob cultivo de cupuaçu (Theobroma grandiflorum), uma espécie frutífera nativa da Amazônia, foi feito um estudo por meio de técnicas moleculares independentes de cultivo. O DNA genômico total das amostras de solo foi extraído por lise direta, utilizando-se o método fenol-clorofórmio. A presença de ácidos húmicos e outros contaminantes encontrados no solo tornou necessária a realização, após a extração, de uma purificação por eluição da banda cortada diretamente do gel, na altura do DNA de interesse. Posteriormente, o DNA foi usado como molde em uma reação em cadeia de polimerase (PCR) utilizando oligonucleotídeos específicos do gene 16S rRNA somente para o Domínio Bacteria. Os “amplicons” foram clonados em vetor TOPO TA e 768 clones foram coletados para a construção da biblioteca genômica. Os clones foram sequenciados e as sequências de nucleotídeos geradas foram analisadas por meio dos programas Phrede/Phrap/Consed disponíveis no site de bioinformática da Universidade Federal do Amazonas (UFAM) e, posteriormente, comparadas com sequências depositadas em banco de dados públicos, como o GenBank do NCBI, utilizando a ferramenta BLAST e o RDP II com o programa “Classifier”. O número de OTU (Unidade Taxonômica Operacional) foi estimado por meio do método de rarefação ao nível de 97% de similaridade e pelos métodos não-parâmetros de estimativa, considerando-se a distância evolutiva de 0.03. Ao se analisar as seqüências obtidas, foram descartadas as com bases de baixa qualidade (‹20). Dos 768 clones selecionados foram considerados válidos 495 clones revelando 208 OTUs. As seqüências foram comparadas com outras depositadas em banco de dados públicos, e apresentaram predominância de microrganismos pertencentes ao Filo Acidobacteria (217 sequências - 43,8% da biblioteca), seguido pelo Filo Proteobacteria (136 sequências - 27,4%). Setenta e seis clones não se encaixaram em nenhum perfil depositado no GenBank ou no RDP II, o que pode implicar a possibilidade da existência de novos grupos bacterianos nos solos amazônicos.