IDENTIFICAÇÃO DO GENE MERA EM BACTÉRIAS RESISTENTES AO MERCÚRIO ISOLADAS DE ECOSSISTEMAS AQUÁTICOS BRASILEIROS

Sheila da Silva Duque (IOC/ FIOCRUZ); Ana Claudia Santiago de Vasconcellos (DSSA/ ENSP/ FIOCRUZ); Adriana de Lima Almeida Bezerra (DSSA/ ENSP/ FIOCRUZ); Raquel Costa de Luca Rebello (DSSA/ ENSP/ FIOCRUZ); Ana Luzia Lauria Filgueiras (IOC/ FIOCRUZ); Renato Aparecido de Farias (FEC); Luis Felipe Hax Niencheski (FURG); Wanderley Rodrigues Bastos (UNIR); Paulo Rubens Guimarães Barrocas (DSSA/ ENSP/ FIOCRUZ)

Introdução: A contaminação ambiental pelo mercúrio (Hg) favorece a proliferação de bactérias que possuem algum tipo de resistência a este elemento. O mecanismo de resistência mais comum consiste na redução dos compostos mercuriais a sua forma metálica (Hg⁰), menos tóxica e hidrossolúvel, decorrente da atividade da enzima mercúrio-redutase, codificada pelo gene merA. Objetivo: Identificar o gene merA em amostras bacterianas resistentes ao mercúrio, isoladas de sistemas aquáticos das regiões Norte, Centro-Oeste, Sudeste e Sul do país. Metodologia: As amostras foram obtidas utilizando sistemas de filtração contendo membranas de 0,22mm, posteriormente transferidas para Caldo Nutriente contendo 5mM de Hg, de onde uma alíquota do crescimento bacteriano foi semeada em placas de Ágar Nutriente com 5mM de Hg para o isolamento de colônias resistentes. As amostras bacterianas (n=107) capazes de crescer no meio de cultura sólido, contendo no mínimo 20mM de Hg, tiveram seu DNA genômico extraído e foram submetidas à Reação em Cadeia da Polimerase, para identificar uma região do gene merA correspondente a 1239pb, utilizando os iniciadores A1 (5' ACC ATC GGC GGC ACC TGC GT 3') e A5 (5' ACC ATC GTC AGG TAG GGG ACC AA 3'). Resultados: Observou-se a presença do fragmento esperado em 52% (n=56) das amostras analisadas e a ausência de qualquer amplificação em 23% (n=24) das amostras. Além do fragmento esperado, foram obtidas bandas de tamanhos variados (entre 700pb e 1000pb) em 25% das amostras (n=27), apesar da utilização de condições de alta estringência na reação. Com base no que é relatado na literatura, acredita-se que estes fragmentos inesperados possam ser decorrentes da diversidade do gene merA e que ao menos algumas das amostras que foram negativas nesta análise possuam o gene merA apenas no DNA plasmidial. Esta hipótese será investigada, assim como os fragmentos amplificados neste estudo serão posteriormente sequenciados e comparados com as sequências disponíveis nas bases de dados existentes. Conclusão: Os resultados sugerem que a ocorrência do gene merA é comum em amostras que apresentam resistência a níveis elevados de mercúrio nas comunidades bacterianas estudadas.