CONSRUÇÃO DE LINHAGENS DE LACTOCOCCUS LACTIS PRODUTORA DO ANTÍGENO HSP65 DE MYCOBACTERIUM LEPRAE: DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO DO PROCESSO DE OBTENÇÃO DA PROTEÍNA RECOMBINANTE LIVRE DE LPS

Naira Roque Electo de Paiva (ICB / UFMG); Clarissa Santos Rocha (ICB / UFMG); Marcela Santiago Pacheco de Azevedo (ICB / UFMG); Kátia Moraes Costa (ICB / UFMG); Célio Lopes Silva (FMRP / USP); Jeanne Blanco de Molfetta Machado (Farmacore); Vasco Ariston de Carvalho Azevedo (ICB / UFMG); Anderson Miyoshi (ICB / UFMG)

Descoberto em 1882 por Robert Koch, o bacilo Mycobacterium tuberculosis (Mtb) ainda permanece como um grande problema de saúde pública, uma vez que é o principal agente causador da Tuberculose (TB), uma doença infecto-contagiosa que atinge quase 1/3 da população mundial. Apesar da BCG, única vacina disponível para uso clínico, ser capaz de proteger crianças eficientemente, ela não é capaz de proteger indivíduos adultos acometidos com a tuberculose pulmonar. Dessa forma, estratégias para o desenvolvimento de vacinas mais eficazes e economicamente viáveis são alvo de intensa investigação. Um grupo de bactérias, as bactérias lácticas (BL), vem sendo muito utilizado como veículo para a apresentação de antígenos exógenos na superfície de mucosas. Além do status “GRAS”, algumas espécies desse grupo são capazes de aumentar a quantidade de IgA nas mucosas e estimular o sistema fagocítico do hospedeiro. As BL são também pouco imunogênicas, ao contrário dos microrganismos patogênicos e, assim, podem ser continuamente utilizadas em programas de imunização. Outra propriedade atraente dessas bactérias é que elas não produzem LPS, o que elimina os riscos de choque por endotoxina. Baseado nisso, vacinas vivas de mucosa utilizando a bactéria láctica Lactococcus lactis como veículo para a entrega de antígenos, surge como uma alternativa segura e interessante no que concerne ao desenvolvimento de uma nova vacina contra a TB. Nesse contexto, nosso grupo de pesquisa construiu linhagens de L. lactis produtoras das formas citoplasmática ou secretada da proteína de choque térmico de 65 kDa (Hsp65) de Mycobacterium leprae, um antígeno imunodominante capaz de induzir efeitos profiláticos e terapêuticos em animais, utilizando um sistema de expressão induzido por xilose (XIES - Xylose Inducible Expression System). No presente trabalho, a capacidade produtiva destas linhagens, em relação à quantidade, qualidade e teor de LPS do antígeno recombinante foi confirmada através dos ensaios de “Western Blotting”, “Bradford” e LAL. Os resultados obtidos revelaram que o antígeno, livre de LPS, é corretamente endereçado para o citoplasma ou meio extracelular. As linhagens recombinantes permitirão, em um futuro próximo, a purificação da proteína recombinante livre de LPS, com alto grau farmacêutico, garantindo assim, sua qualidade, segurança e eficácia.