ANTÍGENOS DE PAREDE CELULAR E FILTRADO DE CULTURA DE HISTOPLASMA CAPSULATUM NA MODULAÇÃO DO SISTEMA IMUNE

Marcia Ribeiro Pinto da Silva (USP); Eliana Barreto Bergter (UFRJ); Phillip Albert James Gorin (UFPR); Carlos Pelleschi Taborda (USP)

Histoplasma capsulatum é o agente etiológico da histoplasmose nas Américas, prevalente principalmente no oeste dos Estados Unidos. No Brasil a distribuição no meio ambiente e as características do seu nicho ecológico são pouco estudadas. A histoplasmose pode apresentar um amplo espectro clínico, desde formas leves até formas graves e disseminadas. A parede celular é de importância vital para a célula fúngica, determinando a sua forma, protegendo-a contra danos mecânicos e funcionando como uma barreira filtrante para moléculas. Apresenta na sua porção mais externa, moléculas glicosiladas que estão envolvidas em importantes funções biológicas relacionadas com a patogenicidade e virulência, além de ser uma fonte significante de antígenos. H. capsulatum foi crescido em caldo BHI suplementado com cisteína 1% a 37ºC, sob agitação. Após 7 dias, as leveduras foram centrifugadas e o filtrado de cultura separado, concentrado em sistema AMICON e liofilizado. Peptideopolissacarídeos foram extraídos da parede celular de leveduras de H. capsulatum com tampão fosfato de sódio 50 mM (pH 7.2), sob refluxo durante 2 horas a 100 °C.  Através das técnicas de RMN de ¹H e ¹³ C, HMQC, TOCSY, ESI-MS e HPSEC, obtivemos uma análise parcial da estrutura química dos antígenos de parede e de filtrado. A análise dos seus derivados hexacetilados, por cromatografia à gás, identificou manose, galactose e glucose na razão molar 75:15:10. Os assinalamentos dos carbonos obtidos pelo espectro de carbono-13 do exoantígeno (d 102.2; 101.0; 98.7) foram similares com os sinais compostos por galactomananas de algumas leveduras, já descritos na literatura. As análises de RMN de ¹³C do antígeno bruto demonstraram um espectro similiar ao exoantígeno. O espectro de HMQC (correlação ¹³C-¹H) demonstra que todas as ligações glicosídicas apresentam a configuração α. Resultados preliminares demonstraram que camundongos BALB/c imunizados com o antígeno extraído de parede de H. capsulatum e posteriormente infectados por via intratraqueal com o fungo, apresentaram uma sobrevida maior quando comparados ao controle não imunizado. Em suporte aos nossos dados, outros autores descreveram previamente a proteção induzida por outros antígenos de filtrado e de parede celular na infecção experimental pelo H. capsulatum.