OBTENÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE ANTÍGENOS RECOMBINANTES PARA O IMUNODIAGNÓSTICO DA TUBERCULOSE HUMANA

Nicolas Marchon (IMPPG/UFRJ); Leila de Souza Fonseca (IMPPG/UFRJ); Rafael Cardoso Maciel Costa Silva (IMPPG/UFRJ); Maria Helena Feres Saad (IMPPG/UFRJ); Walter Mr Oelemann (IMPPG/UFRJ)

A tuberculose (TB) é a doença infecciosa mais prevalente em todo o mundo, gerando 8,8 milhões de novos casos e 2,7 milhões de mortes anualmente, números incrementados com o advento da AIDS. Além do crescimento lento, o diagnóstico da doença também é dificultado pela necessidade de obtenção de escarro, pela sensibilização com outras micobactérias e  vacinação com BCG. Somado a isso, o caráter endêmico e os diferentes estágios da doença remetem a necessidade de novos métodos diagnósticos rápidos, específicos e economicamente viáveis, sendo a tuberculose uma doença socialmente determinada. Neste sentido, os testes sorológicos emergem como uma importante alternativa, aonde diversos antígenos oriundos do agente etiológico da doença – Mycobacterium tuberculosis - vêm sendo estudados e testados sorologicamente, dentre os quais ESAT-6, CFP-10, Tb 9.7, Tb 16.3 e ICD-2. Os genes que codificam os antígenos em questão foram amplificados por PCR e clonados em vetor de expressão em E. coli. Este vetor expressa os antígenos como proteínas de fusão, onde o antígeno é fusionado na sua porção C-terminal ao epítopo V5 e uma cauda de 6 histidinas, e a extremidade N-terminal à tiorredoxina, com o intuito de aumentar a estabilidade da proteína recombinante no sistema heterólogo. Após a expressão dos antígenos recombinantes, as proteínas foram purificadas através de coluna de afinidade de níquel. Quando ensaiados no ELISA com pools de soros com TB e indivíduos sadios, observou-se uma reação cruzada de anticorpos presentes nos soros humanos com a tiorredoxina. Neste sentido, os soros foram pré-adsorvidos com uma suspensão de um extrato de E. coli que expressa tiorredoxina. Os resultados mostram que os antígenos clonados são reconhecidos de forma específica por soros de pacientes com TB. Portanto, esses antígenos podem contribuir para o diagnóstico sorológico da tuberculose.