A composição físico-química e nutricional do solo faz deste um ambiente extremamente variado. Bactérias desse nicho possuem adaptações genéticas que viabilizam sua existência em situações limitantes. Já que o nitrogênio é um elemento essencial para a manutenção dos seres vivos, compondo moléculas como ácidos nucléicos, sua ausência é um fator que pode limitar o desenvolvimento dessas bactérias. Portanto, trabalhos que visem entender os mecanismos de reposta de A. amazonense- o qual ainda não possui genoma seqüenciado- ao estresse de nitrogênio são relevantes. Experimentos prévios de cDNA-RDA indicaram que o gene dnaK, típico de resposta ao choque térmico, e o gene dig, envolvido na formação de biofilme, são expressos em condições de deficiência de nitrogênio. No entanto, a exata regulação desses genes nessa condição de estresse ainda é desconhecida. Portanto o objetivo deste trabalho é identificar elementos cis-atuantes na região promotora dos genes dnaK e dig de A. amazonense.

Nossos resultados, a partir de PCR Genome Walker, técnica para caminhada cromossômica, revelaram uma região codificadora parcial de 1492pb com alta identidade ao gene dnaK de Magnetospirillum magneticum e uma região à montante da região codificadora com 117pb. Análises in silico indicam que a região à montante não apresenta sequencias promotoras dependentes de sigma 54 ou sítios de ligação a NtrC, elementos típicos de resposta à limitação de nitrogênio. Para o gene dig, a partir da mesma técnica, foi isolada uma região codificadora parcial de 700pb com alta identidade ao gene dig de Desulfuromonas acetoxidans.

Pretende-se, através da técnica Real Time-PCR, avaliar outras condições que poderiam regular a transcrição desses genes como privação de carbono e estresse térmico. Outra perspectiva é analisar a atividade dos promotores in vivo em estresse por privação nutricional, utilizando o gene repórter eyfp que codifica para uma proteína fluorescente.

FAPERGS, CNPq & CAPES