MÉTODOS GENOTÍPICOS COMO ALTERNATIVA NO DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE E CORYNEBACTERIUM ULCERANS

Gabriela Andrade Pereira (UERJ); Fabrícia Pires Pimenta (UERJ); Louisy Sanches dos Santos (UERJ); Wagner Oliveira Brito (UERJ); Maria Olívia Gonçalves (UERJ); Luciene de Fátima da Costa Torres (UERJ); Vasco Ariston Azevedo (UFMG); Ana Luiza de Mattos Guaraldi (UERJ); Raphael Hirata Júnior (UERJ)

O aumento significativo no percentual de adultos suceptíveis a difteria e a emergência de amostras de Corynebacterium diphtheriae atoxinogênicas como agente da endocardite e de outras infecções sistêmicas enfatizam a necessidade de procedimentos diagnósticos laboratoriais alternativos. O Corynebacterium pseudotuberculosis tem sido isolado de humanos com linfadenite necrotizante e o primeiro caso de infecção em humanos causado por Corynebacterium ulcerans foi recentemente descrito no Rio de Janeiro. Amostras de C. ulcerans e C. pseudotuberculosis podem carrear o gene da toxina diftérica podendo causar difteria em humanos. A avaliação de um PCR espécie-específico que tem como alvo o gene dtxR foi recentemente descrito como um procedimento para identificaçao do C. diphtheriae. Neste trabalho, descrevemos um PCR Multiplex para detecção de infecção por C. diphtheriae e diferenciação entre amostras toxinogênicas e atoxinogênicas usando 2 pares de iniciadores que tem como alvo os domínios A e B do gene tox e um terceiro par de iniciadores que tem como alvo a região do gene dtxR. Todas as 90 amostras (52 atoxinogênicas e 38 toxigênicas) de bacilo diftérico foram identificadas pelo PCR Multiplex e os resultados do gene dtxR foram negativos para 100% das 120 amostras dos demais corineformes testados, incluindo C. ulcerans e C. pseudotuberculosis. O PCR Multiplex apresentou-se como um método eficiente para identificação simultânea de espécie e toxinogenicidade do C. diphtheriae no diagnóstico clínico e pesquisa epidemiológica. Uma vez que, além do C. diphtheriae, amostras potencialmente toxinogênicas de C. ulcerans e C. pseudotuberculosis podem estar relacionadas a infecções humanas, desenvolvemos um PCR multiplex adicional usando 5 pares de iniciadores para identificar os 3 patógenos e para diferenciação de amostras carreadoras do gene tox. Os resultados demonstraram que a técnica permitiu a identificação simultânea de microrganismos pela presença dos seguintes produtos de amplificação: genes dtxr e rpoB para C. diphtheriae; genes 16S rRNA, rpoB e pld para C. pseudotuberculosis; genes 16S rRNA e rpoB para C. ulcerans; gene da toxina diftérica para amostras toxinogênicas. Logo, o PCR Multiplex simultâneo provou ser um método preciso, rápido e reproduzível para identificaçao e diferenciação de amostras de C. diphtheriae, C. ulcerans e C. pseudotuberculosis.