AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE GENES COMPONENTES DA VIA DO METABOLISMO DE COBRE NO FUNGO PATOGÊNICO HUMANO PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS

Rodrigo da Silva Santos (UFG); Alexandre Melo Bailão (UFG); Mariana Vieira Tomazett (UFG); Célia Maria de Almeida Soares (UFG)

O fungo Paracoccidioides brasiliensis é um patógeno humano com ampla distribuição na América Latina. O fungo causa a paracoccidioidomicose quando propágulos da fase miceliana atingem os pulmões do hospedeiro. O sucesso da infecção depende da aquisição de micronutrientes essenciais como o cobre, o qual é requerido como cofator por uma diversidade de enzimas importantes em processos biológicos essenciais, tais como: respiração, crescimento e aquisição de ferro. Estudos prévios do Laboratório de Biologia Molecular demonstraram que um transportador de cobre de alta afinidade (PbCTR3) é uma molécula altamente expressa e provavelmente necessária para o estabelecimento da infecção por P. brasiliensis. No presente estudo foram isoladas e caracterizadas as seqüências genômica e do cDNA que codificam para PbCTR3 de P. brasiliensis. O cDNA apresentou  582 pares de bases e codifica para uma proteína com 193 aminoácidos, massa molecular predita de 21,5 kDa e pI de 8.6. A seqüência genômica apresenta quatro exons interrompidos por três introns. Análises in silico foram realizadas no banco de dados do genoma estrutural de P. brasiliensis (http:www.broad.mit.edu/annotation/genome/paracoccidioides_brasiliensis/MultiHome.html), onde genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram identificados e as seqüências utilizadas para a elaboração de um modelo de fatores envolvidos na manutenção da homeostase de cobre por P.brasiliensis. O comportamento transcricional do gene Pbctr3 e de genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram analisados durante a exposição de células leveduriformes de P. brasiliensis em condições de depleção de cobre e ferro por qRT-PCR em tempo real. Foi demonstrada uma alteração significativa no nível de transcrição dos genes na ausência de cobre, assim como na ausência combinada dos dois metais.  qRT-PCR em tempo real foi utilizado para analisar a expressão de Pbctr3 e de Pbcrp (que codifica uma proteína responsiva ao cobre) em células leveduriformes de P. brasiliensis derivadas de pulmão e baço infectados, em diferentes tempos. A expressão de Pbctr3 e Pbcrp foi super-regulada durante a infecção experimental. Tomados em conjunto, esses dados sugerem a importância de Pbctr3 e do sistema de absorção cobre/ ferro durante o processo infeccioso.