ESTUDOS FUNCIONAIS E CARACTERIZAÇÃO DE UMA ANIDRASE CARBÔNICA DO FUNGO PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS

Mariana Vieira Tomazett (UFG); Sabrina Fonseca Ingênito Moreira Dantas (UFG); Rodrigo da Silva Santos (UFG); Célia Maria de Almeida Soares (UFG)

Paracoccidioides brasiliensis é um fungo patogênico termodimórfico, ou seja, apresenta duas formas distintas dependentes da temperatura. Esse patógeno apresenta habilidade de crescer tanto na forma leveduriforme a 36ºC in vitro e em tecidos do hospedeiro, quanto na forma miceliana a temperaturas inferiores a 28ºC in vitro e no meio ambiente. O fungo, Paracoccidioides brasiliensis, é o agente etiológico da Paracoccidioidomicose (PCM) e acomete principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino, na faixa etária entre 30 e 60 anos. A paracoccidiodomicose, PCM, é uma micose sistêmica que apresenta distribuição geográfica restrita a países da América Latina, com maior incidência no Brasil. As manifestações clínicas da PCM permitem a definição de duas formas: aguda ou tipo juvenil, a mais severa, e crônica ou tipo adulto, de progressão lenta. As anidrases carbônicas (CA) são metaloenzimas, as quais possuem um átomo de zinco ligado ao sítio catalítico e são responsáveis por catalisar a hidratação reversível do dióxido de carbono para produzir bicarbonato. Sabe-se que essa classe de proteínas auxilia a regulação da homeostase de zinco em vários microrganismos, sendo muitas vezes um importante fator de virulência para a sobrevivência de patógenos em situações zinc-shock. CA é um grupo amplo por apresentar características estruturais distintas entre as classes  α-,β-,γ- δ e ε. No presente trabalho foi caracterizado o cDNA que codifica para anidrase carbônica de P. braseliensis (Pbca)   (número de acesso no GenBank: EU431184). O cDNA completo apresenta 1122 nucleotídeos codificando uma proteína com 301 aminoácidos, massa molecular predita de 33 kDa e pI 6.34. A proteína foi altamente produzida através de expressão heteróloga. Através de experimentos de Westen blot utilizando o anticorpo monoclonal anti-PbCA foram comprovados os resultados obtidos anteriormente por RT-PCR que verificaram a presença do transcrito Pbca em células leveduriformes do fungo P. brasiliensis.