PAPEL DA REGULAÇÃO GÊNICA NA MULTIRRESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS DE ISOLADOS CLÍNICOS DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Livia Regina Bittencourt Oliveira (Fiocruz); Fátima Cristina Onofre Fandinho (Fiocruz); Jesus Pais Ramos (Fiocruz); Teca Calcagno Galvão (Fiocruz)

Apesar de conhecermos os genes alvo e mecanismos de resistência de vários antibióticos disponíveis para o tratamento da tuberculose, uma fração considerável das cepas resistentes de Mycobacterium tuberculosis não apresenta mutações nos genes marcadores conhecidos. A fração de cepas sem mutações detectadas varia entre estudos, mas pode chegar a mais de 20%. Portanto, há um número significativo de pacientes infectados com cepas das que naõ conhecemos as vias implicadas em resistência. Dos genes polimórficos associados a resistência, vários codificam reguladores transcricionais, e sabemos que modulação da regulação de genes de resistência altera o perfil de sensibilidade de M. tuberculosis. Por exemplo, superexpressão do regulador ethR resulta em resistência a etionamida e há isolados multi e extremamente resistentes que apresentam polimorfismo na sequência regulatória a que EthR se une, na região intergênica ethaA-ethR. Neste contexto, estamos executando uma análise sistemática para definir o papel de polimorfismos regulatórios, PoliRegs, na resistência a antibióticos de isolados clínicos de M. tuberculosis. A partir de uma extensa análise da literatura identificamos 12 reguladores transcricionais relevantes a processos de resistência em M. tuberculosis. Para determinar se estes apresentam polimorfismos, sequenciamos produtos de PCR destes genes em 7 cepas sensíveis, 20 cepas multirresistentes, e 4 cepas extremamente resistentes. Nossos resultados mostram que nas cepas analisadas as sequências se mantém selvagem, sugerindo que as mutações conferindo resistência estão em genes marcadores conhecidos. Para aumentar a probabilidade de identificar cepas com PoliRegs, estamos sequenciando os genes marcadores que mais frequentemente apresentam mutações (rpoB, katG, embB, rpsL, rrs, e gyrA) em cepas adicionais. Naquelas que não apresentam  polimorfismos, sequenciaremos os RTs de interesse em busca de PoliRegs. Assim, no processo de identificar PoliRegs analisaremos também a distribuição de mutações em genes marcadores de isolados clínicos de M. tuberculosis. A longo prazo, definiremos se PoliRegs tem de fato um papel mecanístico em tolerância.