CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL E FUNCIONAL DO GENE PACCL, QUE CODIFICA O REGULADOR TRANSCRICIONAL DE RESPOSTA AO PH, DE COLLETOTRICHUM LINDEMUTHIANUM, AGENTE CAUSAL DA ANTRACNOSE DO FEIJOEIRO.

Guilherme Bicalho Nogueira (UFV); Elza Fernandes de Araújo (UFV); Marisa Vieira de Queiroz (UFV)

Colletotrichum lindemuthianum é o agente causal da antracnose, uma das doenças mais severas que acometem a cultura do feijoeiro (Phaseolus vulgaris). Desde o contato inicial até o estabelecimento dos sintomas da doença, C. lindemuthianum  regula a expressão diferencial de genes essenciais para a patogenicidade que vão possibilitar a colonização do tecido hospedeiro e a finalização do seu ciclo de infecção. Nesse trabalho, o gene pacCl, que codifica o regulador transcricional de resposta ao pH ambiental, foi isolado do banco genômico de C. lindemuthianum, utilizando a estratégia de hibridização em placas de lise, foi clonado no vetor pGEM-T, seqüenciado e caracterizado estrutural e funcionalmente. A caracterização funcional foi realizada por hibridização de DNA e PCR em tempo real. Uma seqüência de 2.546 pb foi isolada do banco genômico, correspondente ao gene pacCl. Esta seqüência apresenta uma ORF de 1.746 pb, codificando, portanto, uma proteína de 581 resíduos de aminoácidos. Foram identificados na seqüência, três íntrons putativos, contendo 60, 58 e 74 pb, cada um deles. O alinhamento múltiplo da seqüência deduzida da proteína, com as seqüências disponíveis nos bancos de dados, demonstrou elevado grau de identidade e similaridade da proteína identificada com o regulador transcricional PacC/Him101 de fungos filamentosos e leveduras, respectivamente. Além disso, a proteína PacCl se mostrou eficiente como marcador filogenético em fungos, pois agrupou de forma coerente os organismos taxonomicamente relacionados. A hibridização de DNA usando o gene pacCl como sonda, mostrou que o gene encontra-se em uma única cópia no genoma de C. lindemuthianum. Do mesmo modo, a análise do mutante Mutpac2 por hibridização de DNA, confirmou que o gene pacCl havia sido inativado por um evento de recombinação homóloga do tipo troca gênica. Por fim, a técnica de PCR quantitativo em tempo real mostrou que o gene pacCl é expresso em todas as fases do ciclo de infecção, porém, os maiores níveis foram encontrados no final da fase necrotrófica. Pode-se sugerir que um dos fatores responsáveis por esse aumento, seja a alcalinização do tecido vegetal, decorrente do envelhecimento do tecido, e/ou até mesmo da própria atividade do fungo, que em muitos casos secreta substâncias alcalinizantes, como por exemplo, amônia.