DESENVOLVIMENTO DE UM DIAGNÓSTICO MOLECULAR PELA TÉCNICA DE REAÇÃO EM CADEIA PELA POLIMERASE PARA A DETECÇÃO DO CONIDIOBOLUS LAMPRAUGES EM AMOSTRAS DE TECIDOS.

Daphine Ariadne Jesus de Paula (UFMT); Laila Natasha Santos Brandão (UFMT); Luciana Fernandes Nonato da Silva (UFMT); João Xavier de Oliveira Filho (UFMT); Thaisy Araújo Avalhaes (UFMT); Luciano Nakazato (UFMT); Valéria Dutra (UFMT)

O Conidiobolus sp. é um patógeno responsável por infecções em humanos e animais, sendo as principais espécies, Conidiobolus coronatus, C. lamprauges e C. incongruus. A doença é frequente em ovinos de diversos estados do País e foi diagnosticada no Mato Grosso causada pelo C. lamprauges. O objetivo do trabalho foi padronizar um diagnóstico molecular pela técnica de Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para detecção do C. lamprauges em amostras de tecidos frescos e embebidos em parafina de ovinos com suspeita de conidiobolomicose. Utilizaram-se tecidos frescos (n=9) e parafinados (n=19) de diversos municípios do estado de Mato Grosso e de outros estados como, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Paraíba. Foram testados fragmentos da cabeça, rim, linfonodo, fígado e pulmão. Para avaliar a especificidade utilizaram-se amostras dos fungos, Cryptococcus neoformans, Malassezia pachydermatis, Aspergillus fumigatus, C. coronatus, e C. lamprauges. Os tecidos frescos e as cepas de fungos foram inicialmente maceradas na presença de nitrogênio líquido em seguida extraídos pelo método fenol:clorofórmio e os tecidos parafinados passaram pelo processo de desparafinização  seguido da extração de DNA pelo método fenol:clorofórmio:álcool isoamílico. Os produtos da extração foram submetidos à técnica de PCR com iniciadores universais para fungos, 18S do gene rRNA, e iniciadores específicos para o C. lamprauges (foward primer: 5’-GTGCTGGGGATAATCCATTG-3’; reverse primer: 5’-CGACTTTTGCTTTCTCAAGG-3’), que geram produtos de aproximadamente 540 pb e 222 pb respectivamente. Das amostras testadas com os iniciadores 18S do gene rRNA, foram positivas 100% das cepas de fungos testadas, 08 amostras de tecidos frescos e 09 amostras de tecidos parafinados. As amostras testadas com o primer específico para C. lamprauges, somente a amostra de micélio de C. lamprauges isolada de ovinos foi positiva, 07 amostras de tecidos frescos e 06 amostras de tecido parafinado. A técnica de PCR para detecção do C. lamprauges apresentou uma alta especificidade (100%) e uma melhor amplificação do DNA a partir de amostras de tecidos frescos (77,77%) em relação aos parafinados (31,57%). Conclui-se que a técnica pode ser utilizada como um método diagnóstico rápido e específico e sugere mais estudos com relação a outras espécies de Conidiobolus que possam estar acometendo estes animais.