REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE PARA IDENTIFICAÇÃO SELETIVA DOS ESTREPTOCOCOS DO GRUPO BOVIS

Paulo Henrique Condeixa de França (UNIVILLE); Emanuelle Corrêa Peres (UNIVILLE); Leslie Ecker Ferreira (UNIVILLE); Mauro de Souza Leite Pinho (UNIVILLE)

A identificação usual dos estreptococos pertencentes ao Grupo Bovis (S. infantarius, S. gallolyticus e S.pasteurianus) baseia-se na análise de características fenotípicas. Contudo, essas análises podem ser prejudicadas devido a expressão variável de certas características e da frequente ambiguidade inerente à interpretação dos resultados. O gene sodA ("manganese-dependent superoxide dismutase gene"), presente nos gram-positivos, é considerado uma abordagem valiosa na identificação genotípica dos representantes dos gêneros Streptococcus e Enterococcus. A amplificação de segmentos específicos de DNA utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) permite a detecção de genomas de interesse, mesmo a partir de misturas complexas de ácidos nucléicos. Nesse contexto, objetivou-se o desenvolvimento e padronização da PCR para a detecção molecular das espécies que compõem o Grupo Bovis. Sequências nucleotídicas ("primers") para a amplificação parcial do gene sodA foram definidas e verificadas quanto a especificidade através do emprego das ferramentas computacionais "Primer3" e BLAST, respectivamente. Cepas padrão (ATCC9809, CCUG35224, HDP90246) tiveram seu DNA extraído e purificado com emprego do "Qiamp DNA Mini Kit". Como controle negativo, os genomas de outros organismos (S. salivarius, S. aureus, E. aerogenes, H. sapiens) foram empregados. Diferentes condições de termociclagem foram comparadas no aparelho LGC XP Cycler, seguido de eletroforese em gel de agarose a 1% contendo 0,5mg/mL de brometo de etídeo, por 1 hora à 10V/cm. A confirmação dos resultados se deu via exposição à luz ultravioleta em transiluminador MiniBis Pro. A obtenção de amplicons com 234pb nas amostras padrão e ausência de reação nas amostras dos outros organismos confirma a viabilidade do sistema para a detecção específica dos membros do Grupo Bovis. Nos últimos anos, o interesse por esses microrganismos tem diso crescente, sobretudo pelas evidências de associação com endocardite e câncer de cólon. Portanto, a utilização da metodologia desenvolvida em amostras clínicas pode representar uma alternativa para a sua detecção precoce.