PRODUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE BIOFILMES PARA O ESTUDO DE BIOCIDAS APLICÁVEIS NA PREVENÇÃO DO DESENVOLVIMENTO DE BIOINCRUSTAÇÕES EM SISTEMAS DE PROSPECÇÃO DE PETRÓLEO

Fernando Pereira de Almeida (UFRJ); Gisele Wandermur (UFRJ); Mônica de Oliveira Penna (CENPES-Petrobás); Ulysses Garcia Casado Lins (UFRJ)

Biofilmes são associações de microrganismos aderidos a superfícies e possuem importância econômica para a industria petrolífera, afetando negativamente diferentes etapas da produção de petróleo. Nas atividades off-shore, água do mar rica em sulfato é injetada nos poços para a recuperação secundária de petróleo e as condições anaeróbias que emergem desse processo favorecem o crescimento das bactérias redutoras de sulfato (BRS). As BRS utilizam o sulfato presente na água para produzir energia a partir de compostos orgânicos, resultando na formação de sulfeto de hidrogênio que é extremamente tóxico, inflamável e corrosivo. O crescimento das BRS é combatido com o uso de biocidas. Contudo, esse procedimento é caro e pode gerar danos ambientais. Uma alternativa seria o uso de peptídeos antimicrobianos ou biosurfactantes para inibir o crescimento e adesão de microrganismos sobre superfícies. A combinação da microscopia confocal de varredura a laser (MCVR) associada à análise de imagens com a biologia molecular para a detecção, identificação e caracterização de microrganismos em amostras ambientais pode ser aplicada para testar a eficiência de potenciais biocidas na inibição do desenvolvimento de biofilmes, possibilitando a quantificação de diferentes parâmetros e a aquisição de dados relacionados à estrutura tridimensional dos biofilmes. No presente trabalho, usamos um sistema de produção de biofilmes in vitro para desenvolver um modelo padronizado de testes de novos biocidas aplicáveis na indústria petrolífera. Pseudomonas putida foram crescidas em sistema Lab-tek Chamber Slides^TM em diferentes intervalos de tempo, lavadas em tampão PBS e fixadas com glutaraldeído 2,5% em PBS 0,1M. As amostras foram observadas em um microscópio confocal de varredura a laser e as imagens adquiridas foram analisadas com o uso do software DAIME. O procedimento descrito mostrou-se um método prático e rápido para a análise de biofilmes. Foram observadas notáveis diferenças na espessura e densidade dos biofilmes crescidos por diferentes tempos. Os biofilmes crescidos por mais de 48 horas apresentaram flocos destacados da superfície de crescimento, dificultando a aquisição das imagens de MCVR. Este trabalho consiste em um primeiro passo para o estabelecimento de um protocolo para testes in vitro de biocidas aplicáveis na industria do petróleo. Agradecimentos: CNPq, FAPERJ, Petrobrás.