PRODUÇÃO DE POLÍMEROS BIODEGRADÁVEIS POR ESCHERICHIA COLI RECOMBINANTE A PARTIR DE MISTURA DE AÇÚCARES DERIVADOS DO HIDROLISADO DO BAGAÇO DA CANA DE AÇÚCAR

Karinna Chouman (ICB/USP); Mateus Lopes (ICB/USP); Johana Bocanegra Rodriguez (ICB/USP); Luiziana Ferreira da Silva (ICB/USP)

Polihidroxialcanoatos (PHAs) são materiais poliméricos pertencentes a uma grande família de compostos armazenados intracelularmente por bactérias, que apresentam propriedades termoplásticas que os tornam aplicáveis na produção de plásticos biodegradáveis. Polihidroxibutirato (PHB) é um dos PHAs mais estudados cujas propriedades são comparáveis às do polipropileno. No Brasil, o bagaço de cana de açúcar é um importante resíduo lignocelulósico associado às usinas de açúcar e álcool. A hidrólise do bagaço pode gerar uma mistura de açúcares, dentre os quais as bactérias utilizam preferencialmente a glicose, retardando o uso das pentoses, devido ao fenômeno de repressão catabólica. Em trabalhos anteriores, linhagem de E. coli com repressão catabólica parcialmente abolida (E.coli VH32 PTS- GalP⁺ ) foi construída por deleção do gene ptsH para melhorar a produção de proteínas recombinantes pela redução da produção de acetato. O objetivo deste trabalho é modificar geneticamente esta linhagem a fim de se obter PHA em uma escala de produtividade maior. Para isso, o operon phaCAB de síntese de PHAs de R. eutropha foi clonado em pBluescript SK- e introduzido em E. coli XL1-Blue. Posteriormente, a construção foi transferida para E. coli VH32, gerando E. coli LFM862. A capacidade de acúmulo foi analisada por teste de Sudan Black B. O crescimento de LFM 862 foi testado em 6 formulações diferentes partindo do meio M9 contendo glicose como fonte de carbono, já com a concentração de Na₂HPO₄ de 6g/l para 20g/l, para aumentar sua capacidade tamponante. Dentre os meios testados, M9, M9 com tiamina, M9 com tiamina e ferro, M9 com extrato de levedura, M9 com extrato de levedura e ferro, M9 com extrato de levedura, tiamina e ferro; verificou-se maior velocidade específica de crescimento (μmax de 0,31 h^-1) em meio M9 com extrato de levedura. Este meio foi então selecionado para testes de produção de PHA a partir de mistura de açúcares.