PESQUISA DE BACTERIÓFAGOS PARA ESCHERICHIA COLI EM AMOSTRAS ORIUNDAS DO PROCESSAMENTO DE QUEIJO DE COALHO.

Cristiane Pereira de Lima (UFC); Ana Karine Furtado de Carvalho (UFC); Laura Maria Bruno (CNPAT); Evânia Altina Teixeira de Figueiredo (UFC)

Escherichia coli tem sido frequentemente encontrada em queijos de Coalho e sua presença em água ou alimentos é indicativa de contaminação fecal. Bacteriófagos, ou fagos, são vírus que infectam bactérias e se multiplicam no interior das células. Cada fago é específico para uma determinada bactéria, sendo inócuo para humanos, plantas e animais. Em consequência o uso de fagos tem sido sugerido no combate de bactérias indesejáveis em alimentos. O objetivo deste trabalho foi testar duas metodologias para o isolamento de bacteriófagos líticos para E. coli oriundos do ambiente de processamento de queijo de Coalho. A pesquisa de bacteriófagos foi realizada em amostras de leite, soro e queijo de Coalho coletadas em unidades de processamento de queijo de Coalho, sendo duas produtoras de queijos artesanais e duas, de queijos industrializados, no Ceará. A cepa utilizada nos testes foi Escherichia coli ATCC 11775. Duas metodologias foram testadas. Na primeira, uma alíquota de 0,1 ml da amostra suspeita de conter fagos foi adicionada a 0,2 ml da cultura de E. coli com 16 horas de crescimento. Em seguida foi acrescentado 3 ml de ágar (0,75%) e a mistura foi vertida na superfície de uma camada de ágar sólido (1,5%) e incubada  a 37°C por 24horas. Na segunda metodologia cada amostra foi previamente tratada, antes do plaqueamento, visando um enriquecimento dos fagos. Uma alíquota de 10% da cultura bacteriana foi cultivada a 37°C por 3 horas. Após este período foi adicionado 2 ml  da amostra suspeita de conter fagos e o conjunto foi incubado na mesma temperatura por mais 6 horas. A mistura fagos-bactéria foi centrifugada (10.000 g por 7 min) e o sobrenadante filtrado a vácuo (0,22 µm) para obtenção de um filtrado contendo fagos que foi plaqueado em dupla camada como já descrito. A presença de fagos em ambas as metodologias foi detectada pela formação de zonas claras, ou placas fágicas, sob a zona de crescimento bacteriano. De um total de 12 amostras avaliadas, apenas duas amostras de soro oriundas dos processamentos artesanais apresentaram resultado positivo para a presença de bacteriófagos específicos para E. coli. Em ambos os casos, as placas fágicas foram detectadas apenas pelo emprego da metodologia com enriquecimento, demonstrando que este método foi eficiente para isolar fagos específicos para E. coli do ambiente de processamento de queijo de Coalho.