REGULAÇÃO DE BIOFILMES DE ENTEROBACTER CLOACAE PELO SISTEMA QUORUM SENSING

Adriana dos Reis Ponce (UFV); Solimar Gonçalves Machado (UFV); Ramila Cristiane Rodrigues (UFV); Maria Cristina Dantas Vanetti (UFV)

Os biofilmes podem ser definidos como comunidades de microrganismos imobilizados em uma matriz de substâncias poliméricas extracelulares de origem bacteriana e representam a forma de vida microbiana predominante no planeta. Essas comunidades protegem os microrganismos em ambientes hostis e garantem o acesso a nutrientes para a sobrevivência. A formação de biofilmes pode ser regulada, pelo menos em algumas de suas etapas, pelo mecanismo de quorum sensing, um sistema elaborado de comunicação entre células dependente de densidade celular. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a formação de biofilme em estirpe selvagem e transconjugante, incapaz de acumular AHL, de Enterobacter cloacae 067, um isolado psicrotrófico proteolítico de leite cru refrigerado granelizado. Biofilmes de E. cloacae selvagem e transconjugante formados em cupons de poliestireno foram observados em microscópio eletrônico de varredura. Células de E. cloacae 067 selvagem e transconjugante foram cultivadas em 10 mL de caldo Luria Bertani (LB), por 24 h. Posteriormente, as culturas foram centrifugada a 3.000 g por 10 min. O sobrenadante foi descartado e as células foram lavadas com Meio Mínimo de Sais (MMS), novamente centrifugadas e ressuspendidas em 2 mL de MMS, de forma a se obter uma densidade óptica maior que 1,0. Uma alíquota de 200 μL das suspensões de células foi inoculada nos orifícios de uma placa de poliestireno de 24 poços contendo 1,8 mL de MMS. Após a adição do inóculo, cupons de poliestireno medindo 1,0 x 1,2 cm, previamente higienizados, foram mergulhados nos poços. Após 24 horas de incubação a 30 °C, um cupom foi removido e submetido às etapas de preparação para observação em microscópio eletrônico de varredura (Leo^®, modelo VP 1430). Diferença de adesão entre as estirpes selvagem e transconjugante foi detectada em cupons de poliestireno submersos em meio MMS. A estirpe selvagem formou um biofilme maduro, sendo possível a observação de exopolissacarídeos. Entretanto, constatou-se que a incapacidade de acumular AHL na estirpe transconjugante resultou na redução da adesão, sendo observadas poucas células aderidas. Os resultados obtidos sugerem que o sistema quorum sensing exerça regulação positiva na formação de biofilmes de E. cloacae 067.