DETECÇÃO DE GENES DO SISTEMA DE SECREÇÃO DO TIPO III EM AEROMONAS HYDROPHILA E SUA RELAÇÃO COM A VIRULÊNCIA EM TILÁPIA DO NILO

Glei dos Anjos de Carvalho Castro (UFLA); Carina Oliveira Lopes (UFLA); Carlos Augusto Gomes Leal (UFLA); Patrícia Gomes Cardoso (UFLA); Geraldo Márcio Costa (UFLA); Henrique César Pereira Figueiredo (UFLA)

Aeromonas hydrophila é uma bactéria Gram negativa, pertencente a família Aeromonadaceae, frequentemente associada à septicemia hemorrágica em animais de sangue frio como répteis, anfíbios e peixes. Também é de relevância na saúde pública sendo relacionada principalmente a gastroenterite em seres humanos. A. hydrophila possui diversos fatores de virulência, dentre eles, o sistema de secreção do tipo III (T3SS). Essa complexa estrutura em formato de seringa característica de bactérias Gram negativas tem sido considerada de grande importância pois possibilita que essas modulem seu ambiente, a célula eucariótica hospedeira, pela injeção de toxinas bacterianas diretamente no citosol dessa. O presente estudo teve como objetivos o desenvolvimento de protocolos de PCR  para detecção e avaliação da freqüência dos genes do T3SS, ascV e aopB, em isolados de peixes doentes e de ambientes da aqüicultura; Assim como a relação da presença dos genes com a virulência da bactéria em tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). Foram utilizados 104 isolados provenientes de 12 propriedades diferentes localizadas em três estados brasileiros. A especificidade dos primers foi confirmada pelo sequenciamento dos produtos de PCR demonstrando 98% e 96% de identidade com genes ascV e aopB de A. hydrophila depositados no Genbank. Os protocolos de PCR desenvolvidos possibilitaram a determinação de três perfis diferentes entre os isolados: ascV+/aopB+, ascV+/aopB- e ascV-/aopB-. A freqüência de 62,5% do perfil ascV+/aopB+ em isolados de peixes doentes foi significativamente diferente (P < 0,05) da freqüência de 32,5% em amostras de casos ambientais. Os genes do T3SS se mostraram amplamente disseminados nessa espécie bacteriana uma vez que foram detectados em isolados de todas as propriedades independente da origem. Nos ensaios in vivo foi observada uma maior taxa de mortalidade em grupos de peixes desafiados com bactérias ascV+/aopB+ quando comparados aos desafiados com ascV-/aopB- e ascV+/aopB-. Os resultados obtidos nas análises de freqüência e ensaios in vivo demonstraram que a presença de genes do T3SS potencializa a virulência bacteriana. Os protocolos de PCR estabelecidos se mostraram eficientes e específicos para detecção de genes do T3SS podendo ser utilizados para tipagem de virulência em A. hydrophila.