CLONAGEM E EXPRESSÃO EM ESCHERICHIA COLI DO GENE CRY1IA DE BACILLUS THURINGIENSIS COM ALTA ATIVIDADE CONTRA PRAGAS DAS ORDENS COLEOPTERA E LEPIDOPTERA

Vivian Boter Bergamasco Bergamasco (UNESP); Janaína Fernandes Gonçalves Gonçalves (UNESP); Ricardo Antônio Polanczyk Polanczyk (UFES); Janete Apparecida Desidério Sena Sena (UNESP); Manoel Victor Franco Lemos Lemos (UNESP)

O controle de pragas da cultura algodoeira, como a lagarta-do-cartucho Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) e o bicudo-do-algodoeiro Anthonomus grandis (Coleoptera), pode ser feito utilizando proteínas Cry de Bacillus thuringiensis. Esta é uma alternativa ao uso intensivo de inseticidas químicos, devido à resistência de pragas e à crescente preocupação com a geração de resíduos químicos. As proteínas Cry ou delta-endotoxinas são codificadas pelos genes cry, que podem ser isolados de B. thuringiensis e clonados em Escherichia coli ou modificados em plantas. Com este propósito, o presente trabalho teve por objetivo o isolamento, a caracterização e a clonagem do gene cry1Ia de uma linhagem brasileira de B. thuringiensis, assim como a expressão de sua proteína Cry1Ia em E. coli e a avaliação da atividade inseticida desta proteína frente a larvas de S. frugiperda e A. grandis. O gene cry1Ia (lepidóptero e coleóptero específico) foi inicialmente clonado em pGEM T-Easy, transformado em E. coli DH5α e seqüenciado utilizando a estratégia "Gene Walking". O gene completo foi isolado através de PCR com oligonucleotídeos iniciadores desenhados a partir da seqüência de nucleotídeos obtida e posteriormente foi clonado no vetor pET28a(+), introduzido em E. coli BL21(DE3) e expresso por indução com IPTG. A produção da proteína foi confirmada pelas técnicas de SDS-PAGE e Western Blotting, demonstrando a eficiência do sistema bacteriano de E. coli na expressão da proteína Cry1Ia, com peso molecular de aproximadamente 81 kDa. Esta proteína foi, posteriormente, utilizada nos bioensaios quantitativos frente às larvas neonatas de S. frugiperda e A. grandis, com CL50 de 0,002 μg/ml e de 5,23 μg/ml respectivamente. Estes resultados comprovam a alta toxicidade desta nova proteína para ambas as espécies, sendo de grande interesse para a obtenção de plantas transgênicas de algodão resistentes a estas pragas. Apoio financeiro: CNPq e CAPES.