CARACTERIZAÇÃO DOS GENES RPOH E RELA EM AZOSPIRILLUM AMAZONENSE

Maicon Ricardo Stange Machado (UFRGS); Fernando Hayashi Sant'anna (UFRGS); Debora Broch Trentini (UFRGS)

A batéria Azopirillum amazonense promove o crescimento de plantas com importância econômica através da fixação de N₂ e produção de fitormônios. Sendo assim, esta bactéria apresenta potencial para reduzir o uso de fertilizantes nitrogenados na agricultura, os quais podem tranformar-se em perigosos poluentes. A fixação é energeticamente onerosa, sendo controlada em diferentes níveis pela bactéria. Estudos prévios em nosso laboratório (cDNA-RDA) indicaram que os genes rpoH e relA são transcritos em condições limitantes de nitrogênio. Em Escherichia coli, rpoH codifica a subunidade sigma 32, um fator para genes relacionados ao choque térmico, enquanto relA envolve-se na síntese de ppGpp, um mediador da resposta estringente, fundamental em momentos de estresse nutritivo.
No presente trabalho foram isolados as regiões codificadoras e reguladoras de rpoH e relA pelo método GenomeWalker, baseado na amplificação de sequências alvo a partir de bibliotecas genômicas ligadas a adaptadores. Após efetivou-se a clonagem, sequenciamento e análise dos amplicons com ferramentas de bioinformática. Foram ainda utilizadas matrizes de peso para a busca de potenciais sequências promotoras.
Foi isolado o rpoH completo e 31pb da região 5' adjacente, não permitindo a identificação de sequências promotoras. Sua região à jusante possui um homólogo a genes que codificam proteínas contendo repetições de pentapeptídeos, atribuídas à resistência para antibióticos com ação na DNA girase. Foram isolados 271pb e 1337pb da região reguladora e codificante, respectivamente, do relA. Sua porção 3' está sendo isolada. A análise da região à montante desse gene mostrou um provável promotor dependente do fator transcricional sigma 54, ligado a promotores regulados em função da presença de nitrogênio.
Portanto, a presença de um provável promotor sigma 54 na região à montante de relA corrobora com o isolamento desse gene em condições de privação de nitrogênio. Além disso, o fato desse gene estar associado à resposta à falta de aminoácidos em outros organismos contribui para o entendimento de seu papel fisiológico na bactéria A. amazonense. Já para o rpoH, alguns estudos o sugerem a muitas condições de estresse na célula, mas ainda são necessários mais esforços para vinculá-lo ao estresse por privação de nitrogênio. Futuramente, serão avaliadas, através de qRT-PCR, as condições que propiciam a expressão desses genes em A. amazonense.
Financiamento: PIBIC-CNPq