AVALIAÇÃO DA PRODUÇÃO DE β-1,3-GLUCANASES POR DIFERENTES ISOLADOS DE TRICHODERMA SPP.EM PRESENÇA DE PAREDE CELULAR DE RHIZOCTONIA SOLANI.

Amanda Rafaela Rodrigues (UFG); Fabyano Alvares Cardoso Lopes (UFG); Saulo José Linhares Siqueira (UFG); Murillo Lobo Junior (Embrapa); Cirano José Ulhoa (UFG)

O gênero Trichoderma são fungos não-patogênicos que habitam o solo e vem sendo utilizados como agentes de controle biológico contra fungos fitopatógenos. Os mecanismos envolvidos são competição por nutrientes, produção de antibióticos e enzimas hidrolíticas. Esse último mecanismo envolve a degradação da parede celular através da clivagem de β-1,3-glucanas e quitina, os principais componentes da parede celular de fungos. Dentre as enzimas hidrolíticas as β-1,3-glucanases e quitinases são as mais estudadas. Com o objetivo de obter bons produtores de β-1,3-glucanases e identificar diferentes atividades enzimáticas, foram analisados 19 isolados de Trichoderma spp cedidos pela Embrapa Arroz e Feijão. O isolado ALL-42 (T. harzianum) foi usado como controle para comparar a produção de enzimas pelos diferentes isolados. Os fungos foram crescidos em meio TLE contendo parede celular de Rhizoctonia solani, indutor de produção de β-1,3-glucanases. As culturas foram incubadas a 28°C a 120rpm, coletadas após 48h de crescimento e filtradas para remoção do micélio.O meio de cultura filtrado foi usado como fonte de β-1,3-glucanases. A atividade de β-1,3-glucanase foi determinada utilizando 20μL de solução de laminarina 0,75%, diluída em tampão acetato de sódio 50mM, pH5,0 e 10μL do meio. A mistura foi incubada a 50°C por 10min e a atividade enzimática foi determinada usando o método de detecção de açúcares redutores a 550nm com o reagente ADNS. A quantidade de enzimas produzidas por isolado foi também analisada com ensaio de zimograma (atividade enzimática em gel). Dos 19 isolados, 7 mostraram alta atividade enzimática em ensaio liquido e 3 apresentaram alta atividade específica. O isolado 346/01 produziu mais unidades de β-1,3-glucanases (4,23 U/mL) que o isolado controle (3,61 U/mL), o mesmo também apresentou uma maior atividade específica (291,67 U/mg) em relação ao controle (101,49 U/mg). O zimograma feito com os 7 isolados que apresentaram elevada atividade enzimática e o controle mostrou diferença no perfil de migração em gel das β-1,3-glucanases, mostrando que os isolados produzem β-1,3-glucanases de tamanhos distintos. Os isolados em destaque são candidatos para o estudo de suas enzimas e do seu uso como agente de controle biológico.

Palavras Chave: β-1,3-glucanases; Controle biológico; Rhizoctonia solani; Trichoderma spp.

Instituições de Fomento: CNPQ/FINEP/UFG/FUNAPE