| Área: Microbiologia Clinica ( Divisão A )
PAINEL MOLECULAR PARA A INVESTIGAÇÃO DAS PRINCIPAIS ESPÉCIES MICROBIANAS ASSOCIADAS À SEPSE EM UNIDADES DE TERAPIA  INTENSIVA DE JOINVILLE
Leslie Ecker Ferreira (UNIVILLE); Karilene Dalposso (UNIVILLE); Bruna Hackbarth (UNIVILLE); Glauco Adrieno Westphal (UNIVILLE); Anderson Ricardo Roman Gonçalves (UNIVILLE); Mauro de Souza Leite Pinho (UNIVILLE); Paulo Henrique Condeixa de França (UNIVILLE)
Resumo
A sepse é uma infecção generalizada associada à elevada mortalidade em ambientes hospitalares. São conhecidos alguns dos fatores responsáveis, como o diagnóstico tardio e a terapia imprecisa a base de antibióticos. Nas unidades de terapia intensiva de Joinville, os agentes frequentemente observados são: Acinetobacter baumanni, Candida spp., Enterobacter spp., Escherichia coli, Pseudomonas Aeruginosa e Staphylococcus aureus. Testes moleculares em geral são definidos como sendo testes mais rápidos e precisos e, portanto reduzem a subjetividade dos métodos usuais dos laboratórios clínicos, o que possibilita intervenção e terapêutica com maiores chances de sucesso. O método desenvolvido baseia-se na técnica PCR (Polymerase Chain Reaction) que visa à amplificação de segmentos específicos de DNA, em condições consensuais de reação, possibilitando a detecção em paralelo dos microrganismos investigados. Através do software visual OMP foram desenvolvidos cinco pares de oligonutcleotideos baseados nas sequências codificantes para a fração 18S (Candida) e 23S (bactérias) do RNA ribossomal depositadas no GenBank. Cada par de oligonucleotideo foi avaliado quanto a sensibilidade e especificidade via a amplificação do segmento gênico correspondente as cepas padrão dos microrganismos em estudo. Excetuando A.baumanni, foram obtidas amplicações empregando as mesmas condições de reação. Todos os sistemas desenvolvidos apresentaram especificidade quando testados contra as demais espécies microbianas e H.sapiens. Quanto a sensibilidade o conjunto de primers foi capaz de detectar, por reação, 5pg de DNA de amostras de sangue propositalmente contaminado com as espécies microbianas, confirmando a possibilidade de aplicação em amostras clínicas. Adicionalmente, será realizada a validação do painel de oligonucleotideos proposto em comparação ao método convencional (hemocultura), a partir de amostras de pacientes com diagnóstico confirmatório de sepse.
Fomento: Fundo de apoio a Pesquisa/FAP- UNIVILLE, FAPESC (CP03/2006)
Palavras-chave: Diagnóstico Molecular, PCR, Sepse
Palavras-chave: Diagnóstico Molecular, PCR, Sepse |