TIPAGEM MOLECULAR DE YERSINIA ENTEROCOLITICA BIOTIPO 1A DE ORIGENS DIVERSAS POR ERIC-PCR E PULSED FIELD GEL ELECTROPHORESIS

Fábio Campioni (FCFRP-USP); Juliana Pfrimer Falcão (FCFRP-USP)

Métodos moleculares são utilizados com sucesso em estudos epidemiológicos e filogenéticos de Yersinia enterocolitica. Essa espécie causa, sobretudo, síndrome gastrointestinal em humanos e sua patogenicidade é relacionada a seis biotipos, entre outras características. O biotipo 1A é considerado não-patogênico, entretanto, alguns dados da literatura reportam linhagens desse biotipo como sendo os agentes causais de infecções em humanos e animais. Os objetivos desse estudo foram verificar a similaridade genética de linhagens de Y. enterocolitica biotipo 1A de origem clínica e não-clínica por Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus (ERIC-PCR) e Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), e analisar o poder discriminatório dessas técnicas. Foram estudadas 52 linhagens de Y. enterocolitica biotipo 1A isoladas de humanos (11), animais (11), alimentos (15) e ambiente (15). Para ERIC-PCR, foram utilizados 20pmol de cada primer universal de ERIC, 0,4mM de dNTP, 3mM de MgCl₂, 2U de Klen taq®, tampão da enzima 1X e 100ng de DNA genômico. Os ciclos para a PCR foram de desnaturação inicial a 94°C/7min., seguida por 30 ciclos de: 94°C/30s, 52°C/1 min. e 65°C/8min e extensão final de 65°C/10min. Para PFGE, plugs de agarose foram preparados com crescimento bacteriano em fase logarítima, tratados com lisozima (1mg/mL), proteinase K (0,5mg/mL) e digeridos com 40 unidades de XbaI. A corrida foi feita no aparelho CHEF-DRIII por 29 horas a 6v/cm com pulso inicial de 1s e pulso final de 10s. A construção dos dendrogramas de similaridade genotípica foi realizada pelo programa BioNumerics 5.1, utilizando-se o algoritmo UPGMA e o cálculo de similaridade utilizando o índice Jaccard. O cálculo do índice de discriminação (ID) foi baseado numa variação do Índice de Diversidade de Simpson. O ID de ERIC-PCR e PFGE foi similar, respectivamente 0,98 e 0,99. A técnica de ERIC-PCR agrupou melhor as linhagens por fonte de isolamento. Em ambas as técnicas observou-se uma grande similaridade genotípica entre a maioria das linhagens de animais e humanos sendo essa > 78% no ERIC-PCR e > 77% no PFGE, bem como, entre as de origem clínica e algumas não-clínicas > 66% no ERIC-PCR e PFGE. Esses dados confirmam o potencial zoonótico dessas linhagens e sugerem que os alimentos e o ambiente têm sido uma fonte de contaminação por Y. enterocolitica biotipo 1A.