EXPRESSÃO DE MRNA PARA TLR2, TLR4, TLR5 E IL-8 POR CÉLULAS EPITELIAIS ENDOMETRIAIS DE FETO BOVINO INFECTADOS POR CAMPYLOBACTER FETUS SUBSP. VENEREALIS

Telma Maria Alves (UFMG-EV); Monalisa Sousa Moura Souto (UFMG-EV); Karina Leite Miranda (UFMG-EV); Andrey Pereira Lage (UFMG-EV)

A campilobacteriose genital bovina é uma doença infecciosa de caráter eminentemente venéreo causada pelo Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv). Em fêmeas, as principais características observadas são repetições de cio em intervalos aumentados e irregulares, morte embrionária, vacas vazias no final da estação de monta, o que leva a perdas econômicas bastante consideráveis em rebanhos de corte e de leite. Estudos sobre a interação de Cfv com células de epitélio endometrial bovino (BEE) são importantes, uma vez que, esta interação é a primeira linha de defesa do hospedeiro, desencadeando a resposta imune inata. Os TLRs, receptores de superfície celular, reconhecem moldes moleculares associados à patógenos (PAMPs), que são conservados entre os patógenos, iniciando a cascata de sinalização que leva a produção de citocinas pro-inflamatórias. Este trabalho tem como objetivo avaliar a expressão de mRNA para TLR2, TLR4, TLR5 e IL-8 em cultivo primário de células BEE infectadas com  Cfv. Foi feita uma escarificação do corno uterino fetal para coleta das células epiteliais endometriais, estas foram cultivadas em meio Dulbecco modificado por Eagle e Ham F-12, na proporção 1:1 (v/v DMEM/Ham F-12), contendo 10% de soro fetal bovino, 10mM de HEPES, 200 UI/mL de penicilina e 50 mg/mL de estreptomicina. As células BEE foram inoculadas em placas de 6 poços na concentração de 4x10⁶ células/mL e infectadas com Cfv na multiplicidade de infecção de 500 bactérias/célula e incubadas nos tempos 2, 6 e 12 horas. Após cada tempo, foi realizada a extração de mRNA pelo método TRIzol e, posteriormente, a confecção do cDNA pelo kit TaqMan. A determinação dos níveis de acúmulo de mRNA foi realizada por qRT-PCR em tempo real. Os resultados foram analisados pelo método comparativo de Ct, após normalização baseada na expressão de GAPDH. Os resultados obtidos neste trabalho indicam um pico de expressão de IL-8 com 2h e uma leve redução do acúmulo nos tempos de 6 e 12h. Ocorreu uma expressão de TLR2 e TLR5 em todos os tempos, sendo observado um pico em 6h para TLR2 e um em 12h para TLR5. Podemos Conclui-se que células endometriais de feto bovino infectadas com Cfv podem levar a uma expressão significativa de TLR2 e TLR5, elevando o acúmulo de IL-8. Agradecimentos: Fapemig, Capes, CNPq, FEP MVZ Coordenação Preventiva