SELEÇÃO DE CLONES PRODUTORES DE PROTEASE PRESENTES NA BIBLIOTECA METAGENÔMICA DE TERRA PRETA DE ÍNDIO

Mirna Sayuri Farias Miyamoto (UFAM); Carolinie Batista Nobre da Cruz (UFAM); Maria Francisca Simas Teixeira (UFAM); Rosana Antunes Palheta (UFAM); Valéria Carvalho Santos (UFAM); Spartaco Astolfi-filho (UFAM); Luciana Leomil (ULBRA)

As espécies microbianas existentes no solo podem ser grandes produtoras de bioativos e, principalmente as enzimas proteolíticas, como as hidrolases. Estas, degradam as ligações peptídicas das proteínas, classificadas de acordo com a sua origem e natureza do sítio catalítico, tornando-as de grande interesse biotecnológico devido sua aplicação em processos industriais, como, em setores farmacêuticos, detergentes, panificação, laticínios e cervejaria. Estes compostos são geralmente derivados de microrganismos cultiváveis, em detrimento dos não cultiváveis, porém com as novas técnicas metagenômicas, espera-se que haja uma mudança, trazendo possibilidade de descrição de novos compostos de microrganismos ainda não cultiváveis. Assim, para o presente trabalho foram analisados 1.344 clones da biblioteca metagenômica construída a partir de amostras de solos de Terra Preta de Índio coletados do município de Presidente Figueiredo no Estado do Amazonas, a fim de selecionar enzimas produtoras de protease. Estes clones isolados foram submetidos a ensaios quantitativos de ação proteolítica por meio de substrato contendo caseína, seguido de incubação a 37ºC, resultando em clones produtores de halos proteolíticos. Estes, a fim de testar a eficiência da atividade proteolítica, foram cultivados a 37°C utilizando o substrato azocazeína 1,0% (p/v). Dos 3 clones selecionados (1com halo de 3mm, 2 com halos de 1mm), apenas um clone (3 mm) foi escolhido para realizar o teste de quantificação da produção enzimática, o qual foi colocado sob agitação a 37°C por 24h, produzindo eficiência de 17.7, 22.0, 26.0, 13.3, 19.9 e 20.3 U/mL de enzima em 6, 10, 12, 18 e 24h, respectivamente. Tais resultados sugerem que as enzimas isoladas da Biblioteca Metagenômica de Terra Preta de Índio, possuem a uma atividade proteolítica e se forem submetidas a condições que induzam a expressão, poderão vir a ter uma melhor eficiência e grande aplicabilidade em processos industriais. APOIO: CT-AMAZÔMIA/MCT/CNPq/FAPEAM