IDENTIFICACION DE PRODUCTOS EXTRACELULARES DE UNA BACTERIA MARINA INHIBIDORA DE VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS

Yanett Leyton Lobos (UA); Carlos Riquelme Salamanca (UA)

Introducción
La bacteria pandémica V. parahaemolyticus es responsable de enfermedades gastroentéricas causada por la ingesta de organismos marinos contaminados. Los antibióticos se han usado para combatir éste patógeno, otra alternativa sería la utilización de bacterias que produzcan sustancias inhibidoras. El objetivo de este trabajo es identificar productos extracelulares de una bacteria marina inhibidora de V. parahaemolyticus.

Materiales y Métodos
Identificación: Ensayos de producción de sustancias inhibidoras y  de secuenciación del 16S.
Separación de productos inhibitorios: Se cultiva la bacteria por 72 h, luego se agregó acetato de etilo por 24 h, los productos fueron fraccionados en una columna de silicagel. Al producto activo se le realizó Espectrometría infraroja y Carbono 13.
Curva de crecimiento: El crecimiento de la bacteria se midió a las 0, 6, 12, 24, 30, 36, 48, 54, 60, 72, 78, 90, 96, 102, 108 y 120 h, haciendo recuento en placas. Paralelamente se hizo extracción por solventes, las horas de muestreo fueron 24, 48, 72, 96 y 120 h.
Separación por tamaño: Sobre placas de TSA se pusieron bolsas de diálisis de 1000, 3500, 7500 y 10000 Da, dentro de cada bolsa se agregó cultivo de la bacteria, luego de 24 h se eliminaron las bolsas y sobre el agar se sembró V. parahaemolyticus.
Sensibilidad a temperatura: Sobre placas de TSA se pusieron bolsas de diálisis de 10000 Da, con el cultivo de la bacteria, luego de 24 h se eliminaron las bolsas y el agar se expuso por 1 h a 100ºC, se plaqueo nuevamente el medio y se inoculo V. parahaemolyticus.

Discusión
La bacteria pertenece al género Vibrio, sus productos inhiben el crecimiento de V. parahaemolyticus. El producto activo es un metabolito secundario, menor a 10000 Da, de baja polaridad, termoestable, bacteriostático y orgánico. El IR arroja presencia de OH/Carbonilo y en C13 se cuentan 20 carbonos aproximadamente.

Conclusión
La molécula inhibidora podría ser usado como biocontrol contra V. parahaemolyticus y constituir un aporte a nivel clinico y en la industria acuicola.

Agradecimientos
Proyecto FONDEF MRO7/1006