Introdução: A pirazinamida (PZA), um análogo estrutural da nicotinamida (NIC), é utilizada como droga de escolha para o tratamento da tuberculose desde os anos 80. A necessidade do uso de meio com pH ácido para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) dessa droga aumenta a dificuldade de realização dessa técnica na rotina laboratorial. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade da NIC in vitro para seu uso na determinação de resistência a PZA em Mycobacterium tuberculosis. Material e métodos: Neste estudo foram avaliadas cepas de referência M. tuberculosis H37Rv, Mycobacterium bovis AN5 e nove isolados clínicos de M. tuberculosis (sete resistentes e dois sensíveis a PZA e outras drogas) utilizando a técnica de determinação de resistência em microplaca utilizando a Resazurina como agente revelador de crescimento bacteriano (REMA) e crescimento em Lowenstein-Jensen (L-J) contendo diluições de PZA e NIC. Resultados: A comparação da técnica REMA com o crescimento em L-J utilizando PZA e NIC demonstrou 100% de equivalência. Conclusão: A técnica REMA utilizando NIC parece ser uma alternativa para detecção de resistência a PZA eliminando desta forma, a dificuldade de crescimento do bacilo em pH ácido necessário para determinar a ação da PZA. No entanto, a sua aplicabilidade deve ser melhor avaliada utilizando um maior número de isolados clínicos.