DISCRIMINAÇÃO DE LINHAGENS DE ESCHERICHIA COLI DE DIFERENTES HOSPEDEIROS POR BOX-PCR E FT-IR

Camila Carlos (UNICAMP); Danilo A. Maretto (UNICAMP); Ronei Jesus Poppi (UNICAMP); Nancy C. Stoppe (CETESB); Elayse M. Hachich (CETESB); Maria Inês Z. Sato (CETESB); Laura M. Mariscal Ottoboni (UNICAMP)

A identificação de coliformes e enterococos fecais de origem humana ou animal na água podem indicar a presença de patógenos de veiculação hídrica como, por exemplo, Salmonella e Giardia. Para a implantação de medidas de gerenciamento e remediação mais efetivas da contaminação fecal em águas superficiais, a fonte de contaminação (lançamento de esgoto doméstico, escoamento de fezes animais do solo e outros) deve ser identificada. Dessa forma, o desenvolvimento de métodos para identificação da fonte de contaminação fecal é de fundamental importância para as ações de controle, para preservar a integridade dos corpos d'água e para proteger a saúde da população. Até o momento, não existe um método único e universal para este tipo de análise e as pesquisas nessa área no país são praticamente nulas. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar as técnicas de BOX-PCR e FT-IR (espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier) na discriminação de E. coli de origem humana, bovina e aviária. Foram utilizadas 20 linhagens isoladas de humanos, 15 de bovinos e 16 de galinhas. Essas linhagens foram submetidas à extração de DNA para posterior caracterização utilizando a técnica de BOX-PCR. As linhagens também foram submetidas à caracterização bioquímica por FT-IR. Os fingerprints obtidos por BOX-PCR foram analisados no programa GelCompar II e os resultados foram submetidos a análise discriminante Jackknife utilizando as similaridades máximas. A taxa de classificação correta foi de 80,64%, sendo que 85% das linhagens de humano, 80% das linhagens de bovinos e 75,92% das linhagens de galinhas foram corretamente classificadas. Os espectros de FT-IR foram obtidos, de células intactas crescidas a 37ºC por 16 horas, em um espectrômetro SPOTLIGHT 400N (Perkin Elmer). Os parâmetros utilizados foram: modo imagem, transmitância, 64 scans por pixel, resolução 4 cm^-1, faixa espectral de 2000 a 6000 cm^-1, área de 100 x 100 micrometros. Os espectros foram analisados com o software PLS toolbox 3.5 para MATLAB 7.0. Foi construído um modelo PLS-DA com a segunda derivada da faixa espectral de 2816 e 3026 cm^-1 que permitiu a classificação correta de 100% das linhagens de E. coli. Assim sendo, consideramos a técnica de FT-IR mais promissora do que BOX-PCR para estudos de rastreamento da fonte animal de contaminação fecal.