PADRONIZAÇÃO DA TECNOLOGIA DE MICROARRANJO DE DNA DE MUTANTES DE XANTHOMONAS CITRI SUBSP. CITRI

Elaine Costa Souza (UNESP); Andréia Fujimoto (UNESP); Mônica Andressa das Chagas Cestari (UNESP); Maria Inês Tiraboschi Ferro (UNESP); Jesus Aparecido Ferro (UNESP); Marcelo Luiz de Laia (UDESC)

O Cancro cítrico é umas das principais doenças dos citros e causa perdas significativas na produção mundial. O agente etiológico do cancro é a bactéria gram negativa Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc), que provoca lesões nas folhas, frutos e ramos. Assim como a maioria das bacterioses, pra essa também não possui controle curativo eficiente, sendo que a única maneira de eliminar a doença do pomar é por meio de erradicação das plantas doentes. Pela técnica de mutagênese insercional aleatória utilizando o transposon Tn5, mutantes de Xcc foram obtidos suprimindo alguns genes envolvidos na patogenicidade. Os mutante 03C01 e 02H02 apresentam alteração em genes que fazem parte do grupo hrp (hypersensitive reaction and pathogenicity). Já o mutante 08B07 possui alteração no gene xrvA, que é um fator regulador de virulência. O objetivo deste trabalho foi confirmar a virulência desses 3 mutantes de Xcc por meio de inoculação em folhas de laranjeira Pêra, uma vez que esses mutantes, originalmente, foram avaliados somente em limão cravo, e estudar o efeito dessa mutação na expressão gênica global da bactéria. A análise da expressão gênica desses mutantes foi feita utilizando Xcc exsudadas, cultivadas em folhas in planta por 72 horas. Os resultados obtidos mostram que em 72 horas de cultivo, nenhum sintoma de cancro cítrico foi observado, comparado ao selvagem. As extrações de RNA apresentaram quantidades e qualidades divergentes, ou seja, dos 3 mutantes estudados, 02H02 e 03C01 apresentaram quantidade insuficiente de RNA. Isso pode ser devido a baixa concentração celular in planta. Mas, o mutante 08B07 apresentou qualidade e quantidade suficiente de RNA para prosseguir com os experimentos. A padronização da síntese de cDNA e as marcações com os fluoróforos Cy3 e Cy5 estão sendo realizadas, para que possam ser feitas as hibridizações nas lâminas de microarrajos.