DETECÇÃO DE PROTEÍNAS ANTIGÊNICAS SECRETADAS POR PSEUDALLESCHERIA BOYDII

Ana Carolina Aor (UFRJ); Ana Luiza Gonçalves (UFRJ); Bianca Alcântara (UFRJ); Eliana Barreto-bergter (UFRJ); Rosa Haido (UNIRIO); André Luis Santos (UFRJ)

Pseudallescheria boydii é um fungo ubíquo normalmente encontrado em solo, águas poluídas e material vegetal em decomposição. Mesmo com o aumento do número de casos da infecção causada por Pseudallescheria/Scedosporium, pouco se sabe sobre a fisiologia e bioquímica deste fungo. O presente trabalho teve como objetivo verificar a existência de proteínas antigênicas secretadas pelo micélio de P. boydii. O perfil de proteínas secretadas por P. boydii se manteve constante em quatro diferentes experimentos, sendo composto de proteínas com massas moleculares variando de 115 a 15 kDa. O sobrenadante condicionado apresentou atividade de metaloprotease, capaz de degradar BSA solúvel. Através de Western blotting usando a lectina Concanavalina A demonstramos a presença de pelo menos 5 glicoproteínas na secreção de P. boydii. O sobrenadante condicionado de P. boydii foi inoculado em coelho e um soro hiperimune foi obtido, sendo denominado de anti-proteínas secretadas. Proteínas com massas moleculares variando de 115 a 20 kDa foram reconhecidas pelo anti-proteínas secretadas em ensaio de Western blotting. A reatividade do soro anti-proteínas secretadas foi testada através de ELISA, apresentando reação positiva até uma diluição de 1:800. A presença de uma molécula antigenicamente similar a peptidoramnomanana (PRM) foi detectada no sobrenadante condicionado por Western blotting e ELISA. O uso de soro hiperimune anti-célula total de P. boydii e soro de paciente com pseudallescheriose foram reativos em ELISA e o imunoblotting revelou que as mesmas proteínas foram reconhecidas por estes dois soros. Conídios e micélio de P. boydii foram submetidos a teste de citometria de fluxo (somente conídio) e imunofluorescência utilizando-se os mesmos anticorpos. Os resultados também corroboraram a presença de moléculas antigênicas na superfície destes dois estados morfológicos do fungo em questão. A identificação de proteínas antigênicas pode auxiliar a um correto, eficiente e específico diagnóstico para as infecções causadas por P. boydii.