ATIVIDADE LIPOLÍTICA EM BIBLIOTECAS METANOGÊNICAS CONSTRUÍDAS A PARTIR DE MICROBIOTA DE RESERVATÓRIO DE PETRÓLEO BIODEGRADADO

Suzan Pantaroto de Vasconcellos (CPQBA, UNICAMP); Bruna Martins Dellagnezze (CPQBA, UNICAMP); Cynthia Canedo da Silva (CPQBA, UNICAMP); Eugenio Vaz dos Santos Neto (CENPES); Valeria Maia de Oliveira (CPQBA, UNICAMP)

Apenas 2% dos microrganismos conhecidos e cultivados foram avaliados quanto a seu potencial biocatalítico. Neste sentido, a exploração de ambientes extremos, tais como reservatórios de petróleo, associada às técnicas de investigação metagenômica das comunidades microbianas pode gerar imensurável fonte de novos biocatalistas. Partindo de amostras de petróleo biodegradado (GMR), coletadas na Bacia Potiguar, foram realizados enriquecimentos aeróbios (30 d, 30^oC, 90 rpm) e anaeróbios (90 d, 55^oC, 90 rpm) da microbiota potencialmente biodegradadora de hidrocarbonetos, utilizando-se folhelhos como suportes físicos ao crescimento microbiano e hexadecano, ou óleo não biodegradado, como fontes de carbono e energia. Foram realizadas análises turbidimétricas para a quantificação da redução de sulfato pela microbiota anaeróbia, observando-se índices de 69%. A partir dos enriquecimentos aeróbios e anaeróbios, foi possível a extração de DNA de alto peso molecular e a construção de uma biblioteca metagenômica utilizando-se o kit de clonagem Cloning-Ready Copy Control pCC1FOS (EPICENTRE^®). Um total de 30.000 clones foi obtido a partir da clonagem de DNA misto, proveniente da mistura entre os enriquecimentos aeróbios e anaeróbios. Ensaios para a determinação da atividade lipolítica de 5.000 clones, selecionados aleatoriamente, foram realizados em placas de ágar tributirina, utilizando-se a abordagem de triagens de alto desempenho por cultivo (HTC). Foram detectados 28 hits positivos, os quais se encontram em avaliação quanto à quantificação da atividade lipolítica através do uso de sondas fluorogênicas. A diversidade da microbiota aeróbia e anaeróbia recuperada foi investigada através da construção de uma biblioteca de genes RNAr 16S utilizando-se primers genéricos para o Dominio Bacteria. A análise de 196 clones por metodologia de ARDRA revelou 86 ribotipos distintos. O seqüenciamento e análise filogenética revelou a predominância de bactérias dos gêneros Petrobacter sp. e Flexistipes sp., nos enriquecimentos aeróbios e anaeróbios, respectivamente. Este estudo constitui o primeiro relato da construção e prospecção biocatalítica de bibliotecas metagenômicas a partir de reservatórios de petróleo brasileiros, revelando o potencial dos clones obtidos para futura aplicação biotecnológica.