BIOPROSPECÇÃO DE GENES ENVOLVIDOS NA SÍNTESE DE BIOSSURFACTANTES A PARTIR DE MICROBIOTA DE RESERVATÓRIOS DE PETRÓLEO

Bruna Martins Dellagnezze (CPQBA, UNICAMP); Suzan Pantaroto de Vasconcellos (CPQBA, UNICAMP); Eugênio Vaz dos Santos Neto (CENPES); Valéria Maia de Oliveira (CPQBA, UNICAMP)

Estudos realizados em reservatórios de petróleo indicam que diversos organismos associados a este tipo de ambiente têm potencial para transformar compostos orgânicos e inorgânicos, atuando na interface óleo-água dos reservatórios. O uso de metodologias modernas associado à estratégia de bibliotecas metagenômicas nos permite ter acesso ao potencial metabólico de novos organismos, como a produção de biossurfactantes. O objetivo do trabalho foi realizar a prospecção e a caracterização de genes relacionados à produção de biossurfactantes presentes em microbiota de reservatórios de petróleo, utilizando testes de triagem gênica e funcional. Foram realizados enriquecimentos da microbiota anaeróbia (120 dias) e aeróbia (30 dias) a partir de amostra de petróleo biodegradado coletada na Bacia Potiguar (RN). A extração de DNA de alto peso foi realizada com sucesso utilizando o método de “freeze-thaw” e separação dos fragmentos com tamanho de interesse em eletroforese de campo pulsado. Para a construção da biblioteca metagenômica foi utilizado o kit de clonagem comercial Cloning-Ready Copy Control pCC1FOS (EPICENTRE^®). Um total de 30.000 clones foi obtido a partir da clonagem de DNA misto, proveniente da mistura entre os enriquecimentos aeróbios e anaeróbios. Ensaios funcionais para a detecção da produção de bioemulsificantes encontram-se em andamento, sendo que 2.880 clones já foram triados pela metodologia denominada como teste do colapso da gota. Até o momento, foram obtidos 2104 hits positivos, os quais encontram-se em investigação através de ensaios de similaridade de sequência utilizando primers homólogos a genes descritos pela literatura para a produção de EPS com atividade biossurfactante. Os clones estão sendo avaliados em pools (10 clones) com diferentes pares de primers, sendo que já foram detectados 3 pools positivos para a presença de ramnolipídeos, geralmente presentes em Pseudomonas spp. As próximas etapas do trabalho serão a extração e a caracterização química dos biossurfactantes através de análises colorimétricas. Os biosurfactantes, bem como os clones produtores dos mesmos poderão constituir valiosas ferramentas para aplicação em estudos de biorremediação de petróleo e processos de MEOR.