UTILIZAÇÃO DE MULTIPLEX-PCR PARA A DETECÇÃO DE LEPTOSPIRAS EM AMOSTRAS DE ÁGUA OBTIDAS DE COMUNIDADE CARENTE DO MUNICÍPIO DE PETRÓPOLIS, RJ.

Ilana Teruszkin Balassiano (Fiocruz); Juliana Magalhães Vital-brazil (Fiocruz); Fabiano Sutter de Oliveira (Águas do Imperador); Alberto Dias de Souza Costa (Águas do Imperador); Leandro Hillen (Águas do Imperador); Fabio Teixeira de Oliveira (Águas do Imperador); Patricia Gomes da Penha de Andrade (Águas do Imperador); Martha Maria Pereira (Fiocruz)

A leptospirose é uma zoonose mundialmente distribuída, com características cosmopolitas, causada por bactérias do gênero Leptospira. No Brasil, todas as regiões apresentam casos de leptospirose humana. As comunidades urbanas desprovidas de saneamento básico são as mais afetadas, sendo notificados anualmente, mais de 10.000 casos da doença. O método laboratorial convencionalmente utilizado na detecção de leptospiras, a partir de amostras ambientais, é o isolamento em cultura, porém esta metodologia é laboriosa e consome muito tempo. Alternativamente, a reação em cadeia da polimerase (PCR) tem se mostrado valiosa na rápida e específica detecção deste patógeno. Esta pesquisa, uma parceria entre a empresa Águas do Imperador S/A e o Centro de Referência Nacional para Leptospirose/Fiocruz, teve como proposta padronizar e implementar um protocolo, baseado em PCR, para a determinação da ocorrência de Leptospira spp. em amostras de água coletadas em uma comunidade carente. A região estudada está indevidamente inserida em uma Área de Proteção Ambiental (APA), localizada na Estrada do Contorno, bairro Capela no município de Petrópolis/RJ. Entre o período de maio a julho de 2009, foram coletadas 100 amostras em pontos estratégicos previamente caracterizados como de alto risco, sendo parte deste plano de amostragem o lago, a rede precária de distribuição de água por toda a extensão da comunidade e próximo ao depósito de lixo. Estas amostras foram mantidas sob refrigeração a 4ºC e posteriormente submetidas à filtração em membrana de nitrocelulose, com porosidade de 0,22mm. Os filtros foram diretamente incubados em solução, seguindo o protocolo de extração de DNA por lise alcalina com algumas modificações. O DNA obtido foi utilizado na multiplex-PCR para a detecção de leptospiras saprófitas e patogênicas, através do emprego de iniciadores que permitem a amplificação específica de regiões referentes aos genes rrs2 (RNA ribossomal 16S) e lip32 (Lipoproteína de membrana externa). Utilizando essa metodologia, foi detectada a presença do microrganismo nas localidades próximas ao depósito de lixo e no lago, corroborando com dados epidemiológicos retrospectivos da comunidade estudada, que apontam histórico de óbito por leptospirose. Estudos prévios reconhecem que a água e o solo contaminados pela urina de animais infectados são importantes veículos na transmissão de leptospiras patogênicas Dessa forma, o presente trabalho ressalta a necessidade de ações governamentais no sentido de ampliar a fiscalização para que tal tipo de ocupação não ocorra especialmente em locais com restrições ambientais. Além disso, o método desenvolvido mostrou-se útil no monitoramento de contaminação ambiental por leptospiras, sendo uma ferramenta valiosa para o acompanhamento da incidência desse microrganismo em áreas endêmicas e para o controle do risco de leptospirose humana.