ESTUDO PROTEÔMICO DO MECANISMO DE RESISTÊNCIA DE ESCHERICHIA COLI ATCC 8739 NA PRESENÇA DO PEPTÍDEO ANTIMICROBIANO MAGAININA I

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Simone Maria Neto (UCB); Diana Ribas Rodrigues (UCB); Thais S. Carvalho (UCB); Elizabete de Souza Cândido (UCB); Simoni Campos Dias (UCB); Octávio Luiz Franco (UCB)

Durante toda a história da humanidade, a população mundial foi afetada por infecções causadas por bactérias. Este quadro somente passou a ser controlado com o advento dos antibióticos. Entretanto, as cepas bacterianas mutantes são hábeis em escapar da ação da maioria dos fármacos atualmente desenvolvidos. Peptídeos antimicrobianos (AMPs) têm se mostrado agentes antibióticos eficazes e são potencialmente a próxima geração de antibióticos, especialmente em uso clínico, como no controle às infecções hospitalares. Entretanto, algumas cepas bacterianas já têm se mostrado resistentes até mesmo a AMPs, uma conseqüência natural do breve ciclo de vida e, conseqüente, rápida evolução bacteriana. Dessa forma, o conhecimento aprofundado das formas de resistência a esses novos agentes, faz-se necessário para um possível planejamento racional da próxima geração de antibióticos efetivos, ao menos temporariamente. Neste sentido, este trabalho apresenta a avaliação do mecanismo de resistência bacteriana de Escherichia coli ATCC 8739 ao peptídeo antimicrobiano Magainina I através de proteômica comparativa entre o secretoma de cepas resistentes e não-resistentes. Inicialmente, a concentração mínima inibitória (CIM) de Magainina I capaz de inibir 100% do crescimento de E. coli foi determinada como 75 μg.mL^-1 e ½ CIM foi utilizado para indução de resistência bacteriana, durante 10 propagações subseqüentes. Para tanto, foram obtidas três colônias resistentes à Magainina I (Res-Mag) e três colônias controles susceptíveis denominadas Res-Mag (substituição do AMP por água MilliQ). O perfil protéico avaliado por SDS-PAGE não relevou diferenças marcantes entre os pesos moleculares aparentes entre cepas Res-Mag e Sus-Mag. Entretanto, as análises eletroforeticas bidimensionais comparativas mostraram a presença de 48 diferentes spots proteícos, dos quais 19 estavam presentes apenas em Res-Mag, 14 apenas em Sus-Mag, 2 apresentaram expressão aumentada em Res-Mag, enquanto 10 expressão aumentada em Sus-Mag. Posteriormente, a identificação protéica destes spots por seqüenciamento de novo auxiliará na caracterização e elucidação dos mecanismos de resistência, assim como o desenvolvimento racional da próxima geração de fármacos.