ANÁLISE DO GENE MUTADO DE PSEUDOMONAS SP (LFM693) PARA ESTUDO DO METABOLISMO DE PROPIONATO NA INCORPORAÇÃO DE MONÔMEROS DE CADEIA ÍMPAR EM PHAMCL.

Nathália Fernandes Gonçalves Machado (USP); Estela de Almeida Brandi (USP); Rafael Costa Santos Rocha (USP); José Gregório Cabrera Gomez (USP)

Polihidroxialcanoatos (PHA) são poliésteres acumulados por diversas bactérias na forma de grânulos intracelulares. Existem 2 classes de PHA: PHAscl (short chain lenght) e PHAmcl (medium chain lenght). Este último contém monômeros de cadeia média (6-16 átomos de carbono), são encontrados em Pseudomonas sp e apresentam propriedades elastoméricas. A linhagem LFM693, de Pseudomonas sp, fez parte de um programa de melhoramento genético com o objetivo de estudar o metabolismo de propionato na formação de PHAmcl. Obtida por transposon mini-Tn5, LFM693 destacou-se por ser capaz de elevar a eficiência na oxidação de ácido propiônico durante a fase de acúmulo, aumentando, assim, a incorporação de monômeros de cadeia ímpar em PHAmcl. A incorporação destes monômeros possibilita alterar as propriedadadees elastoméricas do biopolímero contribuindo para ampliar seu espectro de utilização. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o gene interrompido, bem como o número de inserções do transposon mini-Tn5 no genoma de Pseudomonas sp. Para tanto, a cepa mutante foi sequenciada empregando os primers Ext12f, M13f e M13r e, posteriormente, estas sequencias foram analisadas empregando o software TBLASTX e comparadas com outras linhagens de Pseudomonas sp. Em outra análise, foi empregada a metodologia de Southern Blot para analisar em quantos locais distintos o transposon havia se inserido no genoma. As análises das sequencias obtidas permitiram identificar que o transposon foi inserido em uma região que codifica para o gene 2-metilisocitrato liase (prpB). Este gene está relacionado ao ciclo do 2-metilcitrato, o qual está descrito como uma das vias para oxidação de ácido propiônico em procariotos para a incorporação de monômeros de cadeia ímpar. A análise empregando Southern Blot possibilitou identificar apenas um local de inserção no genoma de Pseudomonas sp, corroborando com a característica fenotípica observada e com a análise do sequenciamento. Os dados apresentados no presente trabalho contribuem para o estudo do metabolismo de propionato em procariotos.